[發明專利]一板五聯TORCH-IgM抗體膠體金快速檢測試紙及制備方法

無效

• 申請號: 201110220541.1
• 申請日: 2011-08-03
• 公開（公告）號: CN102323410A
• 公開（公告）日: 2012-01-18
• 發明（設計）人: 胡勇
• 申請（專利權）人: 廣州精達醫學科技有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/531;G01N33/532
• 代理公司: 廣州凱東知識產權代理有限公司 44259
• 代理人: 李俊康

1.一板五聯TORCH-IgM抗體膠體金快速檢測試紙，其特征在于，包括底板、吸收墊、層析膜、用于抗體標記的金標墊和樣品墊；所述層析膜一端連接金標墊的一端、金標墊的另一端與樣品墊連接，所述層析膜的另一端連接吸收墊，所述吸收墊、層析膜、金標墊和樣品墊設置在所述底板上，所述金標墊上吸附羊抗人IgM標記的膠體金結合物顆粒；所述層析膜上包被TORCH五種抗原的檢測線和兔抗羊IgG抗體的對照線，所述層析膜設有檢測線區和對照線區，所述檢測線區和對照線區分別獨立的設有五個條狀帶；所述吸收墊上有與所述層析膜上的檢測線相對應的標識區。

2.如權利要求1所述的一板五聯TORCH-IgM抗體膠體金快速檢測試紙，其特征在于，所述層析膜兩端分別與金標墊和吸收墊連接，所述金標墊和吸收墊分別安裝在所述層析膜兩側邊緣的上部，所述金標墊另一側邊緣上部設置有樣品墊；所述層析膜、金標墊、吸收墊以及樣品墊安裝在底板上；所述層析膜中對照線和檢測線的部分被切割為各獨立的條帶，每一條帶分別包括一個包被抗原的檢測線T和包被抗體的對照線C。

2.如權利要求1或者2所述的一板五聯TORCH-IgM抗體膠體金快速檢測試紙，其特征在于，所述層析膜為硝酸纖維素膜，層析膜上設有檢測線和對照線，檢測線包被弓形體、風疹病毒、巨細胞病毒、單純皰疹病毒I型和單純皰疹病毒II型抗原五種抗原，對照線包被兔抗羊IgG抗體。

3.一板五聯TORCH-IgM抗體膠體金快速檢測試紙的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)獲得TORCH抗原、羊抗人IgM抗體及兔抗羊IgG抗體；

(2)膠體金溶液及膠體金-抗體結合物的制備；

(3)樣品墊與金標墊的處理；

(4)層析膜對照線C、檢測線T的噴劃；

(5)五聯TORCH-IgM抗體膠體金快速檢測試紙的成品組裝。

4.如權利要求3所述的一板五聯TORCH-IgM抗體膠體金快速檢測試紙的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)膠體金溶液及膠體金-抗體結合物的制備步驟如下：

(1)膠體金溶液的制備方法采用檸檬酸三鈉還原法：取硅化過的三角瓶，加入4000mL去離子及40mL?1％質量百分比濃度氯金酸，微波爐加熱沸騰；加入47mL的1％質量百分比濃度檸檬酸三鈉，此時可觀察到淡黃色的氯金酸水溶液很快變成灰色，續而轉成黑色，最后變成穩定的酒紅色后，繼續煮沸15min，冷卻后用去離子水補足體積至4000mL；

(2)羊抗人IgM標記膠體金顆粒的膠體金-抗體結合物制備方法：每4000ml膠體金溶液，按照25μg/ml的比例需要提供羊抗人IgM?100mg，將膠體金溶液和羊抗人IgM溶液分別以0.1mol/L?K₂CO₃調pH至9.0，電磁攪拌羊抗人IgM溶液，在羊抗人IgM溶液加入膠體金溶液，繼續攪拌10min；

(3)采用超速離心法純化：用BSA做穩定劑的膠體金-羊抗人IgM結合顆粒先4000g，4℃離心5分鐘去除沉淀；余下上清再以14000g的離心力，4℃離心1h，棄上清，復溶緩沖液將沉淀重懸為原體積的1/10，4℃保存。

5.如權利要求3所述的一板五聯TORCH-IgM抗體膠體金快速檢測試紙的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)中樣品墊與金標墊分別用各自的處理緩沖液進行浸泡處理，將樣品墊浸入含1％質量百分比濃度BSA和0.05％Tween20的PBS溶液中浸泡15分鐘，取出真空凍干；將金標墊墊浸入含10％蔗糖、0.05％Tween20和0.01％質量百分比濃度疊氮鈉的PBS溶液中浸泡15分鐘，取出室溫晾干。

6.如權利要求3所述的一板五聯TORCH-IgM抗體膠體金快速檢測試紙的制備方法，其特征在于，所述步驟(4)層析膜中對照線C和檢測線T噴劃方法是：將弓形體、風疹病毒、巨細胞病毒、單純皰疹病毒I型和單純皰疹病毒II型五種包被抗原、兔抗羊I?gG抗體分別稀釋至1.5mg/ml、1.0mg/ml，1.5mg/ml，1mg/ml，1mg/ml及2mg/ml；分別加入劃膜儀的1、2、3、4、5和6號杯；調試劃膜儀，噴液量設定為1.4μl/cm，其中1、2、3、4、5號杯在同一水平線上放置，6號杯在距上述杯上方5mm處放置，6號杯的導軌速度是其它杯的5倍；包被后的硝酸纖維素膜過夜晾干。

7.如權利要求4所述的一板五聯TORCH-IgM抗體膠體金快速檢測試紙的制備方法，其特征在于，羊抗人IgM抗體與膠體金結合的pH值為8.2，濃度為25μg/mL。