[發(fā)明專利]一種從紫花苜蓿中提取苜蓿素的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110218687.2
• 申請日: 2011-08-02
• 公開（公告）號: CN102911146A
• 公開（公告）日: 2013-02-06
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李法慶;劉東鋒
• 申請（專利權(quán)）人: 蘇州寶澤堂醫(yī)藥科技有限公司
• 主分類號: C07D311/30
• 分類號: C07D311/30;C07D311/40
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種從紫花苜蓿中提取苜蓿素的方法。

背景技術(shù)

苜蓿素又叫小麥黃素、麥黃酮，化學名5，7-二羥基-2-(4-羥基-3，5-二甲氧基苯基)苯并吡喃-4-酮，CAS號520-32-1，熔點285-286℃，分子式C17H1407，分子量330，分子結(jié)構(gòu)式

苜蓿素是一種黃酮類物質(zhì)，具有輕微抗氧化作用，抗平滑肌松弛及抗腫瘤作用，還具有染色功能。

苜蓿素廣泛存在植物中，但是含量較低，不足于分離純化，在紫花苜蓿中含量較多。制備高純度苜蓿素的方法，多是采用固體填充柱法，如硅膠柱、反相硅膠柱和凝膠柱方法。這種分離方法樣品損失嚴重，操作繁瑣，重現(xiàn)性差。如專利(申請?zhí)?01010605530)“從竹葉中制備高純度苜蓿素的方法”，該專利公開的方法：干燥竹葉用95％乙醇提取，用石油醚萃取，水相濃縮成浸膏；使浸膏上AB-8大孔樹脂柱，先用純水洗脫，再用80％乙醇洗脫，將洗脫液濃縮并干燥；干燥產(chǎn)物中加入鹽酸甲醇溶液，加熱進行酸解處理；所得酸解液上C18柱層析洗脫，收集苜蓿素級分，濃縮；所得濃縮物上凝膠分離柱，用純甲醇作流動相洗脫，收集苜蓿素級分，濃縮到干燥，即得苜蓿素。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有方法的缺陷，提供一種從紫花苜蓿中提取苜蓿素的方法。

本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)的：

一種從紫花苜蓿中提取苜蓿素的方法，其特征在于以下步驟：

1)紫花苜蓿粉碎，加5-8倍量60-80％乙醇回流提取2-3次，提取液濃縮至無醇，加入聚酰胺樹脂中吸附，乙醇溶液梯度洗脫，薄層檢測，收集高濃度流分濃縮后加乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯得粗品；

2)取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水混合，取上相注滿高速逆流色譜柱，轉(zhuǎn)動主機，泵入下相做流動相，流動相溶解粗品由進樣閥進樣，紫外檢測器在線監(jiān)測，收集目標成分，合并流分減壓干燥得高純度苜蓿素。

步驟1)中的乙醇溶液梯度洗脫為：4-5BV40-50％乙醇洗脫雜質(zhì)，再用70％乙醇洗脫。

步驟2)中的正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水混合比例為4-7∶5-8∶3-5∶4-6。

本發(fā)明的技術(shù)優(yōu)勢在于工藝采用高速逆流色譜制備，是一種收率高、制備量大、制備周期短的高效方法，解決了硅膠柱效率低而且污染嚴重的技術(shù)缺陷。

下面將結(jié)合具體實施方式進一步說明本發(fā)明，但本發(fā)明要求保護的范圍并不局限于下列實施例。

具體實施方式

實施例1：

紫花苜蓿草干燥粉碎，取1kg加8倍量80％乙醇回流提取2次，提取液濃縮至無醇，加入200ml聚酰胺樹脂柱吸附，取5BV40％乙醇溶液洗脫雜質(zhì)，再用70％乙醇溶液洗脫，薄層檢測，收集高濃度流分濃縮，濃縮液加等體積乙酸乙酯萃取3次，回收乙酸乙酯得粗品8g。取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按5∶7∶4∶6混合，靜置分層后，取上相注滿高速逆流色譜柱，轉(zhuǎn)動主機，轉(zhuǎn)速調(diào)節(jié)700rpm，泵入下相做流動相，建立動態(tài)平衡后，流速調(diào)節(jié)為3ml/min，同時流動相溶解粗品由進樣閥進樣，紫外檢測器在線監(jiān)測，收集目標成分，合并流分減壓干燥，得910mg黃色粉末，經(jīng)HPLC檢測，含量98.7％。

實施例2：

紫花苜蓿草干燥粉碎，取1kg加5倍量60％乙醇回流提取3次，提取液濃縮至無醇，加入250ml聚酰胺樹脂柱吸附，取4BV50％乙醇溶液洗脫雜質(zhì)，再用70％乙醇溶液洗脫，薄層檢測，收集高濃度流分濃縮，濃縮液加等體積乙酸乙酯萃取3次，回收乙酸乙酯得粗品10g。取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按4∶5∶3∶4混合，靜置分層后，取上相注滿高速逆流色譜柱，轉(zhuǎn)動主機，轉(zhuǎn)速調(diào)節(jié)800rpm，泵入下相做流動相，建立動態(tài)平衡后，流速調(diào)節(jié)為2ml/min，同時流動相溶解粗品由進樣閥進樣，紫外檢測器在線監(jiān)測，收集目標成分，合并流分減壓干燥，得840mg黃色粉末，經(jīng)HPLC檢測，含量98.2％。

實施例3：

紫花苜蓿草干燥粉碎，取1kg加7倍量70％乙醇回流提取2次，提取液濃縮至無醇，加入200ml聚酰胺樹脂柱吸附，取4BV50％乙醇溶液洗脫雜質(zhì)，再用70％乙醇溶液洗脫，薄層檢測，收集高濃度流分濃縮，濃縮液加等體積乙酸乙酯萃取3次，回收乙酸乙酯得粗品7g。取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水按7∶8∶5∶6混合，靜置分層后，取上相注滿高速逆流色譜柱，轉(zhuǎn)動主機，轉(zhuǎn)速調(diào)節(jié)700rpm，泵入下相做流動相，建立動態(tài)平衡后，流速調(diào)節(jié)為1ml/min，同時流動相溶解粗品由進樣閥進樣，紫外檢測器在線監(jiān)測，收集目標成分，合并流分減壓干燥，得780mg黃色粉末，經(jīng)HPLC檢測，含量98.1％。