[發明專利]三聚氰胺己酸及其制備方法和應用

無效

• 申請號: 201110217721.4
• 申請日: 2011-07-31
• 公開（公告）號: CN102391198A
• 公開（公告）日: 2012-03-28
• 發明（設計）人: 吳艷濤;張小榮;劉秋云
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: C07D251/70
• 分類號: C07D251/70;C07K14/765;C07K14/77;C07K16/06;C07K16/44
• 代理公司: 南京知識律師事務所 32207
• 代理人: 盧亞麗

技術領域

本發明涉及三聚氰胺己酸及其制備方法和應用。

背景技術

三聚氰胺是一種三嗪類含氮雜環有機化合物，結構如式（????????????????????????????????????????????????）所示：

??????????????????????????????????????????????式（）。

?三聚氰胺是生產三聚氰胺甲醛樹脂的原料，還可以作為阻燃劑、減水劑、甲醛清潔劑等，是一種用途廣泛的有機化工中間產品。由于三聚氰胺的含氮量高達66.6%，常被非法添加到食品和飼料中充當蛋白質，而常用的蛋白質測試方法“凱氏定氮法”不能區分三聚氰胺和蛋白質。三聚氰胺進入人和動物體內后，發生水解反應，生成三聚氰酸，三聚氰酸和三聚氰胺形成大的網狀結構，造成腎結石，對人類和動物的健康構成嚴重威脅。繼2007年美國發生的寵物“毒糧”事件后，2008年的我國嬰幼兒“毒奶粉”事件以及雞蛋中三聚氰胺含量超標事件相繼發生，三聚氰胺成為食品安全問題中備受關注的焦點。

目前國內外檢測食品和飼料中三聚氰胺的標準方法為色譜法，包括高效液相色譜法、液相色譜-質譜連用法、氣相色譜-質譜聯用法、液相色譜串聯質譜法、反相高效液相色譜法、高效液相色譜-二極管陣列法、高效液相色譜-四極桿質譜聯用法、固相萃取與高效液相色譜聯用法等。色譜法的敏感性和特異性高，但樣品處理時間長，一次檢測的樣品數量少，而且需要專業人員操作復雜的儀器設備?；谔禺愋钥乖涂贵w反應的免疫學檢測技術，如酶聯免疫吸附試驗（ELISA）和膠體金免疫層析試驗，尤其是在ELISA基礎上發展起來的膠體金免疫層析法，具有快速、靈敏、不需要特殊設備、結果判斷直觀、成本低廉等諸多優點，近年來在食品安全檢測領域的應用越來越廣泛。

發明內容

本發明提供三聚氰胺己酸和三聚氰胺完全抗原的制備方法和應用。

本發明所提供的三聚氰胺己酸，具有式（）所示分子結構。

?式（I）。?

本發明所提供的制備式（I）所示化合物的方法，包括如下步驟：

（1）將三聚氰胺溶于DMSO中，加入6-溴己酸和碳酸鈉，三聚氰胺與6-溴己酸的摩爾比為3:1，6-溴己酸與碳酸鈉的摩爾比為1:1，于90℃反應3小時；

（2）于冰浴中析出反應產物，離心，收集沉淀；

（3）加氫氧化鈉溶液溶解沉淀，氫氧化鈉與6-溴己酸的摩爾比為1:1；

（4）逐滴加入鹽酸，至pH值大約為7.0，離心，收集沉淀。

本發明還公開了三聚氰胺己酸化合物在制備三聚氰胺完全抗原中的應用。

所述的三聚氰胺完全抗原，是將式（I）所示化合物和載體蛋白偶聯得到的產物。所述三聚氰胺完全抗原的結構見圖1。

本發明所述的三聚氰胺完全抗原的制備方法，包括如下步驟：

（1）取2mg三聚氰胺己酸溶于2mL二甲基甲酰胺中，加入12mg?N-羥基琥珀酰亞胺和20mg?碳二亞胺，室溫攪拌過夜；4000g?離心10分鐘，取上清，得到A液；

（2）將20mg?載體蛋白溶解于pH?7.4的PBS緩沖液中，得到B液；

（3）將A液緩緩加入B液中，邊加液邊攪拌；4℃、攪拌4~6小時；

（4）取上清液在pH?7.4的PBS緩沖液中透析2~3天，每8小時換液一次。

所述載體蛋白可為牛血清白蛋白或雞卵清白蛋白。

本發明還公開了三聚氰胺己酸化合物在制備針對三聚氰胺特異性抗體中的應用。所述的應用是以三聚氰胺完全抗原為免疫原制備針對三聚氰胺的特異性抗體。

所述針對三聚氰胺的特異性抗體具體可為抗血清或單克隆抗體。

本發明的制備方法簡便、可行。由6-溴己酸上的溴取代三聚氰胺中亞氨基上的氫，生成三聚氰胺己酸；三聚氰胺己酸上的羧基可與載體蛋白上的氨基反應，從而將三聚氰胺結合到載體蛋白，形成具有免疫原性的三聚氰胺完全抗原。以三聚氰胺完全抗原為免疫原，免疫動物后可產生針對三聚氰胺的特異性抗體，而該特異性抗體是建立檢測三聚氰胺的免疫學技術所必需。檢測三聚氰胺的免疫學技術克服了色譜法對樣品預處理的復雜程序，不需要昂貴的儀器設備，可實現對食品和飼料中三聚氰胺的實時、高通量檢測，適合于現場推廣應用。

附圖說明

圖1?三聚氰胺完全抗原的結構示意圖。

圖2?三聚氰胺的電噴霧離子化（ESI-MS）質譜圖。

圖3?三聚氰胺己酸的電噴霧離子化（ESI-MS）質譜圖。