[發(fā)明專利]畢赤酵母壁蛋白Gcw5及其表面展示系統(tǒng)和構(gòu)建方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110217256.4
• 申請(qǐng)日: 2011-07-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102260336A
• 公開(kāi)（公告）日: 2011-11-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 林影;周新瑩;張莉;葉燕銳;韓雙艷;鄭穗平
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華南理工大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K14/39
• 分類號(hào): C07K14/39;C12N15/31;C12N15/81;C12N1/19
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 何淑珍

1.一種巴斯德畢赤酵母壁蛋白Gcw5，其特征在于，該蛋白的氨基酸序列如SEQ?NO：1所示。

2.編碼權(quán)利要求1所述巴斯德畢赤酵母壁蛋白GCW5的基因，其特征在于，核苷酸序列如SEQ?NO：4所示。

3.一種巴斯德畢赤酵母細(xì)胞表面展示系統(tǒng)，其特征在于，是以權(quán)利要求1所述的巴斯德畢赤酵母壁蛋白Gcw5為錨定蛋白，將靶蛋白固定在巴斯德畢赤酵母細(xì)胞表面構(gòu)成的。

4.權(quán)利要求3所述的巴斯德畢赤酵母表面展示系統(tǒng)的構(gòu)建方法，該方法由以下步驟組成：

（1）將權(quán)利要求2所述的基因克隆到表達(dá)載體的表達(dá)盒中，得到以權(quán)利要求1所述巴斯德畢赤酵母壁蛋白為錨定蛋白的表面展示表達(dá)載體；

（2）將靶蛋白的基因序列克隆到所述表面展示表達(dá)載體的巴斯德畢赤酵母壁蛋白基因序列的上游，與所述巴斯德畢赤酵母壁蛋白基因形成融合基因；

（3）轉(zhuǎn)化巴斯德畢赤酵母，根據(jù)所述表達(dá)載體上的篩選標(biāo)記篩選陽(yáng)性轉(zhuǎn)化子，即得到表面展示系統(tǒng)。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述表達(dá)載體包括帶有分泌信號(hào)肽序列的巴斯德畢赤酵母表達(dá)載體。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述表達(dá)載體為pPIC9K、pPICZαA、pPICZαB、pPICZαC、pGAPZαA、pGAPZαB或pGAPZαC。

7.根據(jù)權(quán)利要求4～6之一所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述靶蛋白為堿性木聚糖酶、米黑根毛霉脂肪酶或南極假絲酵母脂肪酶B。

8.根據(jù)權(quán)利要求4～6之一所述的構(gòu)建方法，其特征在于，所述巴斯德畢赤酵母為巴斯德畢赤酵母GS115。