[發明專利]一種含HIPK2基因的重組質粒無效
| 申請號： | 201110217195.1 | 申請日： | 2011-08-01 |
| 公開（公告）號： | CN102277383A | 公開（公告）日： | 2011-12-14 |
| 發明（設計）人： | 周利紅;李琦;范忠澤;王炎;殷佩浩;慈書俊;周寧 | 申請（專利權）人： | 上海中醫藥大學附屬普陀醫院;上海市普陀區中心醫院 |
| 主分類號： | C12N15/85 | 分類號： | C12N15/85;C12N15/66 |
| 代理公司： | 上海信好專利代理事務所(普通合伙) 31249 | 代理人： | 賈慧琴;姜玉芳 |
| 地址： | 200062 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 hipk2 基因 重組 質粒 | ||
【權利要求書】：
1.一種含HIPK2基因的重組質粒，其特征在于，該重組質粒包含HIPK2基因的編碼序列以及載體質粒DNA序列，所述的載體質粒DNA序列中包含與HIPK2基因連接的調節序列；所述的重組質粒通過以下步驟構建：
步驟1，以含有人HIPK2基因的真核表達載體pENTR223.1/HIPK2為模板設計引物序列，分別引入Nhe?I和Kpn?I酶切位點；
步驟2，對HIPK2基因進行PCR擴增；
步驟3，對所得HIPK2基因序列和載體質粒進行Nhe?I和Kpn?I雙酶切以及純化；
步驟4，將步驟3所得產物進行T4?DNA連接酶酶切，使HIPK2基因目的片段和載體質粒相連接；?
步驟5，用步驟4所得連接產物轉化大腸桿菌感受態細胞；
步驟6，將步驟5所得重組質粒進行酶切鑒定陽性克隆并測序。
2.如權利要求1所述的含HIPK2基因的重組質粒，其特征在于，所述的HIPK2基因的編碼序列也包含該基因天然發生的等位基因變異體的編碼序列，以及天然發生或人工變異體的編碼序列中的任意一種。
3.如權利要求1所述的含HIPK2基因的重組質粒，其特征在于，所述的載體質粒是可以在宿主中復制和生存的真核表達質粒。
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