[發明專利]畢赤酵母壁蛋白Gcw45及其表面展示系統和構建方法

有效

• 申請號: 201110215803.5
• 申請日: 2011-07-29
• 公開（公告）號: CN102260329A
• 公開（公告）日: 2011-11-30
• 發明（設計）人: 林影;張莉;周新瑩;葉燕銳;韓雙艷;鄭穗平
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: C07K14/39
• 分類號: C07K14/39;C12N15/31;C12N15/81;C12N1/19
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 何淑珍

1.一種巴斯德畢赤酵母壁蛋白Gcw45，其特征在于，該蛋白的氨基酸序列如SEQ?NO：1所示。

2.編碼權利要求1所述巴斯德畢赤酵母壁蛋白GCW45的基因，其特征在于，核苷酸序列如SEQ?NO：4所示。

3.一種巴斯德畢赤酵母細胞表面展示系統，其特征在于，是以權利要求1所述的巴斯德畢赤酵母壁蛋白Gcw45為錨定蛋白，將靶蛋白固定在巴斯德畢赤酵母細胞表面構成的。

4.權利要求3所述的巴斯德畢赤酵母表面展示系統的構建方法，該方法由以下步驟組成：

（1）將權利要求2所述的基因克隆到表達載體的表達盒中，得到以權利要求1所述巴斯德畢赤酵母壁蛋白為錨定蛋白的表面展示表達載體；

（2）將靶蛋白的基因序列克隆到所述表面展示表達載體的巴斯德畢赤酵母壁蛋白基因序列的上游，與所述巴斯德畢赤酵母壁蛋白基因形成融合基因；

（3）轉化巴斯德畢赤酵母，根據所述表達載體上的篩選標記篩選陽性轉化子，即得到表面展示系統。

5.根據權利要求4所述的構建方法，其特征在于，所述表達載體包括帶有分泌信號肽序列的巴斯德畢赤酵母表達載體。

6.根據權利要求5所述的構建方法，其特征在于，所述表達載體為pPIC9K、pPICZαA、pPICZαB、pPICZαC、pGAPZαA、pGAPZαB或pGAPZαC。

7.根據權利要求4～6之一所述的構建方法，其特征在于，所述靶蛋白為堿性木聚糖酶、米黑根毛霉脂肪酶或南極假絲酵母脂肪酶B。

8.根據權利要求4～6之一所述的構建方法，其特征在于，所述巴斯德畢赤酵母為巴斯德畢赤酵母GS115。