[發明專利]一種反相高效液相色譜快速檢測苯乳酸異構體的方法

無效

• 申請號: 201110215766.8
• 申請日: 2011-07-29
• 公開（公告）號: CN102288703A
• 公開（公告）日: 2011-12-21
• 發明（設計）人: 徐學明;徐進;趙文秀;楊哪;金征宇
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所 32104
• 代理人: 時旭丹;劉品超

技術領域

一種反相高效液相色譜快速檢測苯乳酸異構體的方法，本發明涉及藥物合成中間體和食品防腐劑光學純的L-型和D-型苯乳酸的手性快速分析方法。屬于高效液相色譜分析技術領域。

背景技術

苯乳酸（即2-羥基-3-苯基丙酸）是乳酸菌產生的一種物質，具有廣譜的抑菌性，能夠抑制多種食源性致病菌（如致病性大腸桿菌、單核細胞增李斯特菌和金黃色葡萄球菌）和腐敗菌（赭曲霉、疣孢青素和桔青霉）。因此，苯乳酸是一種繼乳酸、醋酸、nisin之后，可用于食品體系的新型抑菌物質。除了在食品工業中的應用外，苯乳酸異構體在藥物合成方面也占有舉足輕重的作用。苯乳酸對映異構體是生物活性肽的主要成分，比如具有高效蛋白酶抑制作用的銅綠菌素、小菌素。臨床實驗中的高效抗鼻病毒化合物——Ruprintrivir就是由p-氟代-3-苯乳酸合成的。D-(+)-3-苯乳酸是環狀縮酚肽（YM-254890）重要成分，其特異的抑制Gq/11蛋白。L-(?)-3-苯乳酸是合成抗病毒和抗腫瘤藥物（mycalamides、pederin、onnamides、theopederins）的手性中間物。

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目前對苯乳酸分離的方法主要有薄層層析、毛細管電泳以及手性柱高效液相色譜法。其中薄層色譜的方法只能定性檢測和半定量檢測苯乳酸。雖然毛細管電泳對其旋光異構體具有較好的分離，但與高效液相色譜相比，使用不如后者廣泛且毛細管電泳只能用于分析，不具有制備的條件。而已有的高效液相色譜檢測方法是利用手性柱對其進行旋光異構體的拆分。與本發明相比，手性柱價格昂貴。

發明內容

本發明目的是提供一種經濟、快速的分析苯乳酸旋光異構體的方法。可用于藥物合成中間體苯乳酸對映異構體的純度檢測，及在生產苯乳酸時的定性定量檢測。

本發明的技術方案：一種利用反相高效液相色譜分析DL-3-苯乳酸對映異構體的方法，步驟為：

a)?將環糊精溶解于緩沖溶液中，得到含有手性選擇劑的環糊精緩沖液，作為流動相：流動相采用緩沖液-有機相體系，緩沖液:有機相體積比為95:5～60:40；流動相中含環糊精手性選擇劑，濃度范圍為5mM～50mM；?

b)?將DL-3-苯乳酸、D-(+)-3-苯乳酸和L-(?)-3-苯乳酸分別用蒸餾水或流動相溶液配制成濃度為1～50mg/mL的溶液；

c)?將上述苯乳酸溶液分別進樣，用液相色譜系統進行手性分析；所述的色譜柱是普遍配備液相系統的反相C18色譜柱；采用步驟a)所述之流動相；柱溫10～60℃；檢測波長范圍240～270nm；

所述環糊精手性選擇劑選用α-環糊精、β-環糊精或對α-環糊精、β-環糊精改性后的環糊精衍生物；

所述有機相為甲醇；

所述緩沖液選用以下緩沖體系之一種：磷酸氫二鈉-檸檬酸緩沖液、檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液、檸檬酸-氫氧化鈉-鹽酸緩沖液。

本發明的有益效果：首先，采用本發明的手性試劑拆分方法可制備得到光學純的苯乳酸。其次，通過此方法制備得到的光學純的苯乳酸可以作為藥物合成中間體繼續合成所需藥物。再次，本發明亦可適用于苯乳酸生產和研究中的定性定量測定，及作為生物防腐劑在食品工業中的計量檢測。最后，本發明中采用的分析方法操作簡便，檢測快速，定量準確，重現性好，是一種適于工業化快速分析的方法。

附圖說明

圖1??L-(?)-3-苯乳酸標準樣品的色譜圖及紫外吸收光譜圖。

圖2??D-(+)-3-苯乳酸標準樣品的色譜圖及紫外吸收光譜圖。

圖3??DL-3-苯乳酸標準樣品的色譜圖及紫外吸收光譜圖。

圖4??L-(?)-3-苯乳酸標準樣品的圓二色譜圖。

圖5??D-(+)-3-苯乳酸標準樣品的圓二色譜圖。

圖6??實施例3的檢測條件保留時間為16.908min色譜峰對應的圓二色譜圖。

圖7??實施例3的檢測條件保留時間為19.108min色譜峰對應的圓二色譜圖。

具體實施方式

實施例1???L-(?)-3-苯乳酸標準樣品的檢測