[發明專利]來源于棉花的miRNA-GhmiR156及其應用

無效

• 申請號: 201110214056.3
• 申請日: 2011-07-28
• 公開（公告）號: CN102277357A
• 公開（公告）日: 2011-12-14
• 發明（設計）人: 劉進元;薛偉;王正明
• 申請（專利權）人: 清華大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/82;A01H5/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

技術領域

本發明涉及一種生物技術領域，尤其涉及一種來源于棉花的miRNA-GhmiR156及其應用。

背景技術

miRNA(microRNA，微小RNA)是一類長度約為20-24nt的內源單鏈非編碼小分子RNA，在生物體中廣泛存在(Bartel?D?P.MicroRNAs：genomics，biogenesis，mechanisms，and?function.Cell，2004，116：281-297.)。近年來大量研究表明，miRNA能夠調控生物體中許多基因的表達，在調節生長發育、細胞增殖、凋亡、抵御環境脅迫等諸多方面發揮重要作用(Bushati?N，Cohen?S?M.MicroRNA?functions.Annu.Rev.Cell?Dev.Biol.，2007，23：175-205.；金龍國，王川，劉進元.植物MicroRNA.中國生物化學與分子生物學報，2006，22：609-614.)。植物miRNA主要通過切割靶基因mRNA，或抑制靶mRNA翻譯，來調控植物個體生長發育并影響其生理過程，是一種新的基因調控模式，具有重要的研究意義(Voinnet?O.Origin，biogenesis，and?activity?of?plant?microRNAs.Cell，2009，136：669-687.)。

棉花是世界最重要的經濟作物之一，同時棉花纖維也是研究單細胞伸長的良好模型。與擬南芥、水稻等模式生物相比，目前已經發現的棉花miRNA數量可謂寥寥無幾，因此通過高通量測序技術，有望挖掘出更多的棉花miRNA，這對于全面了解棉花乃至整個植物miRNA的形成過程、結構特點和功能機制具有現實意義。另外，棉花中miRNA可能在諸多生理過程(如纖維的起始與伸長等)發揮重要功能，但棉花中關于miRNA的生物學功能研究甚少，因此，通過關注特定發育時期、特定組織中的miRNA，有望闡明棉花miRNA參與的生理過程，以及在該過程中具體發揮的作用。

我國是世界上主要的棉花生產和消費國，棉花對于我國具有舉足輕重的地位。國內外除了利用常規育種手段之外，逐步運用基因工程技術對水稻品質(產量、抗蟲等)進行遺傳改良已經成為了一種趨勢。由于miRNA對植物有廣泛的調控作用，很可能成為植物遺傳改良的重點研究基因之一，因此迫切需要通過大規模測序方法充分挖掘和開發屬于本國知識產權的新的miRNA基因，從而為后期定向改良和培育優質性狀的棉花品種奠定基礎。

發明內容

本發明的目的是提供來源于棉花的miRNA-GhmiR156及其應用。

本發明保護的miRNA-GhmiR156的序列如下(5′→3′)：

UUGACAGAAGAUAGAGAGCAC(序列表的序列1)。

本發明保護的miRNA-GhmiR156前體(pre-GhmiR156)序列如下(5′→3′)：

GAGAGGUUUGACAGAAGAGAGUGAGCACACGCAGGCAGAUUGUAUGAAAGGCCAUACCUUUGCCCGCCGUGUGCUCACUUCUCUUCUGUCAGCUUA。(序列表的序列2)。

本發明還保護序列1所示RNA或序列2所示的RNA在抑制SPL9轉錄因子(DW504749)基因表達中的應用；所述SPL9轉錄因子的氨基酸序列為序列表的序列3。

所述SPL9轉錄因子基因的核苷酸序列為序列表的序列4。

本發明還保護序列1所示RNA或序列2所示的RNA在促進SPL9轉錄因子基因(DW504749)的mRNA降解中的應用；所述SPL9轉錄因子的氨基酸序列為序列表的序列3。

所述SPL9轉錄因子基因的核苷酸序列為序列表的序列4；

所述促進SPL9轉錄因子基因的mRNA降解為切割SPL9轉錄因子基因的mRNA。

本發明還保護序列1所示RNA或序列2所示的RNA在棉花纖維品質改良中的應用。

Solexa克服了常規miRNA克隆技術的缺點，具有靈敏度高的優點，能夠檢測出最少一個小RNA分子，并且準確性高，檢出的小RNA分子堿基錯誤率極低。同時該技術還具有高通量、大規模的特點，兩個文庫的測序量高達500萬條小RNA序列以上。基于這種最新的測序手段，將有望識別棉花中特定發育時期特定組織特異表達的新miRNA。