[發明專利]Non-B Ig單抗RP215在細胞增殖、遷移及干細胞研究中的應用

無效

• 申請號: 201110211923.8
• 申請日: 2011-07-27
• 公開（公告）號: CN102901817A
• 公開（公告）日: 2013-01-30
• 發明（設計）人: 邱曉彥;李吉祐;劉偉;廖沁園;黃晶
• 申請（專利權）人: 北京大學;李吉祐
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/574
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技術領域

本發明涉及特異性識別人Non-B?Ig重鏈可變區的單克隆抗體RP215在判定細胞在增殖、遷移、化療藥物抗性及識別腫瘤/成體干/祖細胞方面的應用，對提高臨床和實驗室對腫瘤細胞惡性度及轉移的判定、指導臨床治療及對腫瘤/成體干/祖細胞的深入研究具有重要的應用價值。?

背景技術

一、非B細胞免疫球蛋白研究現狀?

傳統的免疫學理論認為免疫球蛋白基因僅在B淋巴細胞發育過程中進行選擇性重排，故免疫球蛋白是B淋巴細胞的特征性產物。但1996年，邱曉彥等通過免疫組化、Western?Blot等發現在多種上皮性惡性腫瘤細胞的胞漿中存在與免疫球蛋白抗原性相同且分子結構相似的蛋白分子，而其它正常上皮細胞均為陰性反應(中國免疫學雜志；1996，5：296)；隨后邱曉彥等又分別從蛋白水平和mRNA水平證實Ig分子在非B細胞來源的腫瘤細胞中表達；并且發現應用Ig特異的反義寡核苷酸以及抗Ig抗體都可誘導腫瘤細胞凋亡、抑制其生長(CANCER?RESEARCH?63，6488-6495，October?1，2003)。目前，我們課題組對于腫瘤來源Ig生物學活性的研究已有了很大發展。我們的研究發現，體外利用ASODN或抗人IgG抗體來抑制腫瘤來源IgG可增加細胞程序性凋亡，抑制細胞生長。在裸鼠體內實驗中，抗人IgG抗體可以抑制分泌IgG的癌細胞系HelaMR的生長。而且，不只是腫瘤細胞，一些增殖旺盛的上皮細胞也會表達Ig，增生的乳腺細胞、肝硬化中增殖的肝細胞和癌巢周圍的上皮組織中均有Ig分布。在癌前病變中Ig的表達出現上調，說明腫瘤細胞分泌的Ig可能對癌癥的發生有重要作用，具有促進腫瘤細胞生長和維持其生存的作用。目前上述發現?已經得到國內外幾個課題組的證實和認可(Cancer?Res，2006.66(8)：p.3996-4000；Cancer?Biomark.，2009.5(4)：p.177-188)。但在過去的10年里，我們課題組及其他的課題組都應用以循環血Ig分子作為免疫原制備的單克隆或多克隆抗體(商品化)，通過免疫組化、Western?blot等方法發現了Ig分子、特別是IgG分子在多種非免疫細胞來源的腫瘤組織及一些正常組織細胞中高表達。但用該類抗體沒有發現IgG在正常組織中上皮的基底細胞及膽管上皮細胞等具有強分裂能力及遷移能力的細胞及腫瘤肝細胞中高水平表達，并參與細胞遷移及干細胞的功能。?

二、RP215來源及研究現狀?

加拿大英屬哥倫比亞大學的Lee課題組早在上個世紀80年代，為了獲得特異性識別卵巢癌的單克隆抗體，曾用卵巢癌細胞系提取的蛋白免疫動物，獲得了近3000株雜交瘤細胞，在篩選的過程中發現，其中有一株雜交瘤細胞，稱之為RP215，能夠很好地識別卵巢癌細胞而不識別正常卵巢細胞，但當時不清楚其所識別的抗原是什么，暫取命名為“CA215”。后來發現，RP215不但能夠很好地識別卵巢癌，同時在對其它類型的腫瘤細胞識別中也顯示了良好的特異性，由此將CA215定義為“pan-cancer?marker”。2007年，Lee課題組對CA215進行了鑒定。他們用親和層析的方法，從卵巢癌細胞系培養上清中獲得了大量的“CA215”，質譜鑒定所提供的32條肽段均為IgG的重鏈，為了進一步確認這一結果，他們又用純化的“CA215”作為抗原制備了5株特異性單抗，實驗結果證實，所有5個單抗都識別IgG分子(Cancer?Biol?Ther，2008.7(12)：p.2007-14.)。至此，證明了CA215就是癌胞表達的IgG(Cancer?Biol?Ther.，2009.8(2)：p.161-6)。隨后的結果證實，癌細胞表達的IgG在糖基化修飾與循環中IgG有明顯差異。RP215所識別的表位正是這類IgG重鏈可變區特有的糖基類相關?表位。盡管已有報道RP215可用于臨床腫瘤病人的血清檢測(Cancer?Biomark.，2009.5(4)：p.177-88.)，但這種抗體在判定細胞在增殖、遷移、化療藥物抗性及識別腫瘤/成體干細胞方面的應用還沒有報道。?

三、成體/腫瘤干細胞研究背景?