[發(fā)明專利]一種基于納米金增強(qiáng)的多種肺癌標(biāo)志物的高靈敏檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110211260.X
• 申請(qǐng)日: 2011-07-22
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102313814A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-01-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 賈春平;景奉香;趙輝;金慶輝;趙建龍
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院上海微系統(tǒng)與信息技術(shù)研究所
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N33/574
• 代理公司: 上海智信專利代理有限公司 31002
• 代理人: 潘振甦

1.一種多種肺癌標(biāo)志物的高靈敏度檢測(cè)方法，其特征在于基于納米金生物復(fù)合探針微陣列和納米金增強(qiáng)，進(jìn)行檢測(cè)的步驟是：首先將待測(cè)蛋白的捕捉抗體點(diǎn)樣到微陣列上，然后在納米金上標(biāo)記上待測(cè)蛋白的多克隆或單克隆檢測(cè)抗體，然后將標(biāo)記好待測(cè)蛋白質(zhì)單克隆或多克隆捕捉抗體的蛋白微陣列及納米金生物復(fù)合探針與待測(cè)蛋白質(zhì)樣品混合，37℃孵育一段時(shí)間，洗去沒(méi)有反應(yīng)的納米金探針，加入金增強(qiáng)反應(yīng)液，肉眼或顯微鏡下觀察、或用CCD掃描拍照，根據(jù)灰度值測(cè)定相應(yīng)的蛋白濃度。

2.按權(quán)利要求1所述的檢測(cè)方法，其特征在于具體步驟為：

(a)蛋白抗體微陣列制作

用芯片點(diǎn)樣儀將各檢測(cè)蛋白的抗體及質(zhì)控點(diǎn)點(diǎn)在醛基修飾的玻璃基片上，室溫放置16小時(shí)以上，置4℃保存；

(b)構(gòu)建納米金生物復(fù)合探針

在pH?6～9情況下，納米金顆粒水溶液可與待測(cè)蛋白質(zhì)相對(duì)應(yīng)的抗體結(jié)合，根據(jù)膠體金凝集實(shí)驗(yàn)確定各抗體的用量，將各抗體與納米金溶液室溫條件下混勻一段時(shí)間，再加入質(zhì)量百分濃度為0.1％-20％的聚乙二醇，4℃過(guò)夜，離心，洗去未標(biāo)記上的抗體，用納米金重懸液重懸標(biāo)記好的納米金生物復(fù)合探針，置4℃保存?zhèn)溆茫?/p>

(c)免疫反應(yīng)

將標(biāo)記好各待測(cè)蛋白抗體的芯片及納米金生物復(fù)合探針與待測(cè)蛋白質(zhì)樣品混合，37℃孵育一段時(shí)間，然后再洗去沒(méi)有反應(yīng)的納米金探針；顯色

(d)加入金增強(qiáng)反應(yīng)液后，室溫輕搖3-5min，肉眼觀測(cè)或用CCD拍照。

3.按權(quán)利要求2所述的檢測(cè)方法，其特征在于步驟(c)中所述重懸液組成為牛血清白蛋白BSA?0.25-10％、聚乙烯吡咯酮PVP?0.1-1％、蔗糖1.5-10％、聚乙二醇PEG?0.01-1％、吐溫Tween20?0.2-1％。

4.按權(quán)利要求2所述的檢測(cè)方法，其特征在于步驟(d)中金增強(qiáng)反應(yīng)液組成為次氯金酸HAuCl·3H₂O?0.1-100mM、鹽酸羥胺NH₂OH·HCl0.1-100mM、明膠Gelatin1-10％，以上均為質(zhì)量百分濃度。

5.按權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的檢測(cè)方法，其特征在于所述的方法適用于肺癌早期檢測(cè)和肺癌微轉(zhuǎn)移檢測(cè)。

6.按權(quán)利要求5所述的檢測(cè)方法，其特征在于檢測(cè)蛋白質(zhì)的靈敏度達(dá)pg/ml級(jí)。