[發(fā)明專利]一種地黃多倍體誘導(dǎo)方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110209574.6
• 申請(qǐng)日: 2011-07-19
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102318556A
• 公開(kāi)（公告）日: 2012-01-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李明軍;陳明霞;趙喜亭;張曉麗;王建軍;龔玉佳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河南師范大學(xué)
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 新鄉(xiāng)市平原專利有限責(zé)任公司 41107
• 代理人: 毋致善

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明涉及一種植物選育方法，特別是一種地黃多倍體誘導(dǎo)方法。

背景技術(shù)：

地黃，特別是懷地黃，具有很好的藥用價(jià)值。由于多種病蟲(chóng)害，導(dǎo)致其產(chǎn)量降低，品質(zhì)退化。因而，優(yōu)良品種的選育已成為懷地黃生產(chǎn)亟待解決的問(wèn)題。多倍體的巨大型效應(yīng)，不僅使植株具有巨大的營(yíng)養(yǎng)器官，更高的營(yíng)養(yǎng)成分含量，同時(shí)它對(duì)逆境的抗耐性也增強(qiáng)。對(duì)于藥用植物來(lái)說(shuō)，多倍體植株由于染色體的加倍，藥用成分的含量也會(huì)有所增加，其中活性成分的含量也會(huì)相應(yīng)增加。同時(shí)染色體加倍還增強(qiáng)了多倍體植株的生態(tài)適應(yīng)性及對(duì)逆境的抗耐性。本實(shí)驗(yàn)以懷地黃試管苗為材料，研究不同秋水仙素濃度及處理時(shí)間對(duì)懷地黃多倍體誘導(dǎo)的影響，并從細(xì)胞學(xué)方面對(duì)其進(jìn)行鑒定，尋找懷地黃多倍體誘導(dǎo)的有效方法，為懷地黃優(yōu)良品種的選育提供新的途徑。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明的目的是提供一種品質(zhì)優(yōu)和抗耐性強(qiáng)的一種地黃多倍體誘導(dǎo)方法。實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的的技術(shù)方案是，一種地黃多倍體誘導(dǎo)方法，其特征在于有以下步驟：(1)將懷地黃試管苗切除葉片后的帶芽莖段在快繁培養(yǎng)基MS+NAA?0.01～0.05mg/L+6-BA?0.05～0.5mg/L中培養(yǎng)4～5d，(2)然后放入濃度為0％、0.02％、0.05％、0.08％、0.1％的秋水仙素溶液中，浸泡時(shí)間為24h、48h、72h，浸泡后用無(wú)菌水沖洗干凈后接種到MS培養(yǎng)基上，12h·d-1光照下培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度均為(28±2)℃，(3)將形態(tài)明顯變異的試管苗帶芽莖段接種到MS+NAA?0.01～0.05mg/L+6-BA?0.05～0.5mg/L培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)2～3次后，即可得到地黃多倍體試管苗。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)比較多倍體誘導(dǎo)的地黃的品質(zhì)優(yōu)良且抗耐性較強(qiáng)的顯著優(yōu)點(diǎn)。

具體實(shí)施方式：

結(jié)合下述實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明：

(1)懷地黃多倍體的誘導(dǎo)

將懷地黃試管苗切除葉片后的帶芽莖段在快繁培養(yǎng)基MS+NAA0.01～0.05mg/L+6-BA?0.05～0.5mg/L中培養(yǎng)4～5d。然后放入濃度為0％、0.02％、0.05％、0.08％、0.1％的秋水仙素溶液中，浸泡時(shí)間為24h、48h、72h。浸泡后用無(wú)菌水沖洗干凈后接種到MS培養(yǎng)基上，12h·d^-1光照下培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度均為(28±2)℃。將形態(tài)明顯變異的試管苗帶芽莖段接種到MS+NAA?0.01～0.05mg/L+6-BA?0.05～0.5mg/L培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)2～3次，20d后進(jìn)行初步的形態(tài)學(xué)觀察，初步確定秋水仙素濃度為0.1％處理時(shí)間為24h時(shí)，誘導(dǎo)效果最好，存活率達(dá)29.0％，誘導(dǎo)率44.44％。

(2)多倍體的形態(tài)鑒定

變異株與對(duì)照相比，其葉片寬而大，邊緣有缺刻，葉色濃綠，根短而粗壯，并出現(xiàn)輕微木質(zhì)化，根據(jù)這些表型特征對(duì)變異材料進(jìn)行初選。

(3)多倍體的氣孔鑒定

撕取植株基部向上第2～3葉片的下表皮制片，在OLYMPUS顯微鏡下觀察并測(cè)量氣孔大小，隨機(jī)分別測(cè)定50個(gè)對(duì)照和變異株氣孔的長(zhǎng)徑和短徑，計(jì)算其平均值，發(fā)現(xiàn)變異植株的氣孔顯著增大。

(4)多倍體的染色體鑒定

取氣孔顯著增大的變異植株30株，每株隨機(jī)取白色根尖作試材進(jìn)行染色體觀察。采用改良苯酚品紅染色法制片，在顯微鏡下觀察并攝像。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，對(duì)照植株染色體數(shù)目是2n＝56，變異植株的染色體數(shù)目是2n＝112，這說(shuō)明通過(guò)試驗(yàn)獲得了四倍體。