[發(fā)明專利]Roundup Ready轉(zhuǎn)基因大豆檢測用引物組及其檢測試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110208466.7
• 申請日: 2011-07-25
• 公開（公告）號: CN102337331A
• 公開（公告）日: 2012-02-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 曹以誠;杜正平;陳洵;李志勇;高東微;茅麗娜
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州華峰生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 廣州粵高專利商標(biāo)代理有限公司 44102
• 代理人: 陳衛(wèi)

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物檢測試劑，具體涉及一種Roundup?Ready轉(zhuǎn)基因大豆檢測用引物組及其診斷試劑盒。

背景技術(shù)

孟山都公司于1994年研制的抗草甘膦品種大豆，轉(zhuǎn)化了來自于微生物Agrobacterium?tumefaciens的5-烯醇丙酮酸莽草酸-3-磷酸合成酶（CP4?EPSPS）編碼基因，能夠抵抗除草劑草甘膦對莽草酸合成途徑的抑制，使轉(zhuǎn)基因大豆在噴灑除草劑之后能夠正常生長。該品種的受體是大豆品種A5403，轉(zhuǎn)基因大豆基因組中整合了外源的?CP4?EPSPS?基因、E35S?啟動子和NOS?終止子。該品種是目前種植面積最大的轉(zhuǎn)基因大豆品種，廣泛應(yīng)用在食用油和食品的加工生產(chǎn)當(dāng)中。

為了加強(qiáng)對轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的監(jiān)督和管理，目前發(fā)展了多種轉(zhuǎn)基因成分檢測方法，從基于蛋白質(zhì)的?ELISA?檢測技術(shù)到基于核酸的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）技術(shù)以及快速發(fā)展的基因芯片技術(shù)。其中?PCR?檢測技術(shù)以其靈敏性、特異性、高效性而最為通用，這種技術(shù)通過檢測轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品中含有的外源核酸片段來鑒定，隨著熒光實(shí)時定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（real?time?PCR）的出現(xiàn)，不僅能夠進(jìn)行轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的定性鑒定，而且可以對轉(zhuǎn)基因成分進(jìn)行定量。

以?PCR?技術(shù)為代表的轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測技術(shù)在實(shí)際應(yīng)用中也存在一些問題，如普通?PCR?技術(shù)需要專門的儀器，而且存在容易交叉污染和操作過程煩瑣的缺點(diǎn)。而?Real?time?PCR?技術(shù)雖然較好地解決了交叉污染的問題，并簡化了操作過程，但卻需要更復(fù)雜的定量測定儀器，因此不適用于現(xiàn)場快速檢測。而且實(shí)時定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)PCR技術(shù)中熒光探針的成本較高，加大了推廣應(yīng)用的難度?；蛐酒夹g(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)快速和高通量的檢測，然而價格昂貴，檢測成本高。所以及時運(yùn)用生物技術(shù)發(fā)展的最新成果對滿足轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測要求的不斷提高具有重要意義。其中等溫擴(kuò)增（Isothermal?Amplification）核酸快速檢測技術(shù)是轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測技術(shù)上的長足進(jìn)步，現(xiàn)已建立起來的環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)（loop-mediated?isothermal?amplication?of?DNA,?簡稱LAMP）具有很多的優(yōu)越性，且目前也未見有用環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)檢測?轉(zhuǎn)基因大豆快速診斷試劑盒。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種對可用于環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)檢測Roundup?Ready轉(zhuǎn)基因大豆EPSPS-NOS基因，且對該EPSPS-NOS基因具有高特異性的檢測用引物組。

本發(fā)明的另一個目的在于提供一種檢測成本低、使用方便、檢測速度快、特異性高的基于環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)的轉(zhuǎn)基因大豆快速診斷試劑盒。

本發(fā)明的上述目的是通過如下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn)的：

一、本發(fā)明的Roundup?Ready轉(zhuǎn)基因檢測用引物組，是基于環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)，根據(jù)已公開的Roundup?Ready轉(zhuǎn)基因大豆EPSPS?-NOS基因序列，選取Roundup?Ready轉(zhuǎn)基因大豆EPSPS-NOS基因的特異性序列，然后分析設(shè)計出的，能專一性鑒別Roundup?Ready轉(zhuǎn)基因大豆EPSPS-NOS基因的特異性引物組，通過LAMP法來鑒定Roundup?Ready轉(zhuǎn)基因大豆EPSPS-NOS基因，該EPSPS-NOS基因引物組由如下四條引物組成：

外引物F3的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:1所示；

外引物B3的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:2所示；

內(nèi)引物FIP的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:3所示；

內(nèi)引物BIP的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:4所示；

或者，

外引物F3的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:5所示；

外引物B3的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:6所示；

內(nèi)引物FIP的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:7所示；

內(nèi)引物BIP的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:8所示；

或者，

外引物F3的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:9所示；

外引物B3的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:2所示；

內(nèi)引物FIP的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:10所示；

內(nèi)引物BIP的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:4所示；

或者，

外引物F3的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:11所示；

外引物B3的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:12所示；

內(nèi)引物FIP的核苷酸序列如SEQ?ID?NO:13所示；