[發明專利]一種同時測定杜仲中多種活性成分含量的方法

有效

• 申請號: 201110207936.8
• 申請日: 2011-07-22
• 公開（公告）號: CN102890126A
• 公開（公告）日: 2013-01-23
• 發明（設計）人: 李湘洲;張勝;胡文彬;賀義昌
• 申請（專利權）人: 中南林業科技大學;李湘洲
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 長沙正奇專利事務所有限責任公司 43113
• 代理人: 盧宏

技術領域

本發明涉及一種杜仲中多種活性成分的含量測定方法，特別是同時測定京尼平苷酸(GPA)、綠原酸(CA)、松脂醇二葡萄糖苷(PDG)和蘆丁(Rutin)含量的測定方法。

背景技術

杜仲(Eucommia?ulmoides?OLiv)為杜仲科杜仲屬多年生落葉喬木，是我國的傳統經濟作物，有第四紀冰川“活化石”之稱，分布長江中游及南部各省，河南、陜西、甘肅等地均有栽培。杜仲具有補肝腎、強筋骨、安胎、降血壓之功效。其主要的活性成分有木脂素類、環烯醚萜類、苯丙素類、黃酮類等。主要的代表性成分分別是松脂醇二葡萄糖苷(木脂素類)、京尼平苷酸(環烯醚萜類)、綠原酸(苯丙素類)、蘆丁(黃酮類)

以上活性成分質量控制，一般采用紫外-可見分光光度法(UV)，薄層掃描法(TLCS)及高效液相色譜法(HPLC)。

2010版中國藥典規定杜仲中松脂醇二葡萄糖苷的含量測定方法為高效液相色譜法，用十八烷基基硅烷鍵合硅膠為固定相，以甲醇-水(25∶75)為流動相，檢測波長277nm。規定杜仲葉中綠原酸的含量測定方法為為高效液相色譜法，用十八烷基基硅烷鍵合硅膠為固定相，以乙腈-0.4％磷酸水溶液(13∶87)為流動相，檢測波長327nm。

現有技術中，檢測杜仲中活性成分HPLC法為較常使用的分析手段。但目前文獻及國家標準報道中只能同時控制1～3種成分。在實際操作中我們發現，松脂醇二葡萄糖苷在277nm處有最大吸收，而在254nm處吸收峰強度大幅減弱；京尼平苷酸則在254nm處有最大吸收，而在277nm處吸收峰強度大幅減弱，因此二者很難同時測定；而綠原酸與松脂醇二葡萄糖苷的極性相近，使用常規的等度洗脫方法色譜峰的分離效果不佳。

發明內容

針對現有技術的不足，本發明采用了改變波長與梯度洗脫法相結合的方法，提出了一種同時測定杜仲及其產品中的松脂醇二葡萄糖苷、京尼平苷酸、綠原酸和蘆丁含量的方法，且采用的色譜條件與目前已報道的相關文獻中的方法完全不相同。本發明分別開展了線性關系考察，穩定性試驗，精密度試驗，重現性試驗和加樣回收試驗對方法進行驗證，證明本分析方法準確，可靠。

本發明的技術方案是：一種同時測定杜仲中多種活性成分含量的方法，采用高效液相色譜法分析，色譜條件為：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流動相梯度洗脫程序(見表1)為：流動相A為甲醇，流動相B為質量濃度為0.1％的磷酸水溶液；從0.01min-30.00min內流動相B的體積百分含量從30％按照一階線性梯度增加到70％；在30.00min-30.01min時降低至30％，并在30.01min-40.00min內保持30％不變；流速：0.8ml.min^-1；柱溫：30℃；進樣容積為5μl；

檢測波長選擇程序(見表2)為：0.01min-7.00min選擇254nm，7.00min-12.50min選擇277nm，12.50min-40.00min選擇254nm；

其中所述的多種活性成分為京尼平苷酸(保留時間4.7～5.0min，檢測波長254nm)；綠原酸(保留時間8.0～9.0min，檢測波長277nm)；松脂醇二葡萄糖苷(保留時間9.5～10.5min，檢測波長277nm)；和蘆丁(保留時間20.0～21.0min，檢測波長254nm)。

流動相梯度洗脫程序見表1，檢測波長程序見表2：

表1流動相程序

表2檢測波長程序

與現有技術相比，本發明的優勢在于：

1、本發明所提供的測定方法可以同時測定杜仲中多種活性成分含量，可同時測定杜仲及其產品中代表性有效成分松脂醇二葡萄糖苷、京尼平苷酸、綠原酸和蘆丁，提高了檢測效率。

2、本發明做了大量方法學驗證試驗，分別開展了線性關系考察，穩定性試驗，精密度試驗，重現性試驗和加樣回收試驗對方法進行驗證，證明本測定方法準確，可靠。

附圖說明：

圖1混合對照樣品在本發明的色譜條件下的HPLC圖；

圖2采用本發明方法分離杜仲葉中有效成分的HPLC效果圖；

圖3采用本發明方法分離杜仲皮中有效成分的HPLC效果圖；

圖4采用本發明方法分離杜仲葉提取物中有效成分的HPLC效果圖；

其中，圖中各峰標識：1號峰為京尼平苷酸；2號峰為綠原酸；3號峰為松脂醇二葡萄糖苷；4號峰為蘆丁。

具體實施方式