[發明專利]同時檢測蜂王漿中氟胺氰菊酯、三唑醇和蠅毒磷殘留量的方法

有效

• 申請號: 201110207902.9
• 申請日: 2011-07-25
• 公開（公告）號: CN102297914A
• 公開（公告）日: 2011-12-28
• 發明（設計）人: 周萍
• 申請（專利權）人: 杭州蜂之語蜂業股份有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 杭州天欣專利事務所 33209
• 代理人: 陳紅

1.一種同時檢測蜂王漿中氟胺氰菊酯、三唑醇和蠅毒磷殘留量的方法，其特征在于：所述方法用到的試劑包括色譜純的乙睛、水、分析純的無水硫酸鈉、正丙醇、氟胺氰菊酯、三唑醇、蠅毒磷、分析純的氨水和色譜純的甲醇，該方法包括標準儲備溶液配制工序、混合標準中間液配制工序、標準液配制工序、標準曲線制備工序、樣品處理工序和樣品檢測工序；

所述標準儲備溶液配制工序中，稱取10mg氟胺氰菊酯、10mg三唑醇和10mg蠅毒磷分別置于一號10mL容量瓶、二號10mL容量瓶和三號10mL容量瓶中，向一號10mL容量瓶、二號10mL容量瓶和三號10mL容量瓶中加入乙腈并均定容至10ml分別制得濃度均為1000mg/kg的氟胺氰菊酯標準儲備溶液、三唑醇標準儲備溶液和蠅毒磷標準儲備溶液；

所述混合標準中間液配制工序中，分別取100μl氟胺氰菊酯標準儲備溶液、100μl三唑醇標準儲備溶液和100μl蠅毒磷標準儲備溶液置于四號10mL容量瓶中，向四號10mL容量瓶中加入乙腈并定容至10ml制得濃度為10mg/kg的混合標準中間液；

所述標準液配制工序中，取兩份濃度為10mg/kg的混合標準中間液100μl，分別用乙腈配至濃度為100μg/kg的一號混合液和濃度為1000μg/kg的二號混合液；稱取五份陰性基質樣品，每份陰性基質樣品的重量均為2g，將五份陰性基質樣品分別置于一號瓶、二號瓶、三號瓶、四號瓶和五號瓶中；再向一號瓶、二號瓶和三號瓶中分別加入濃度為100μg/kg的一號混合液100μl、200μl和500μl，向四號瓶和五號瓶中分別加入濃度為1000μg/kg的二號混合液100μl和200μl；所述一號瓶、二號瓶、三號瓶、四號瓶和五號瓶中的液體先各自混合3-5分鐘，再各自靜置15分鐘后待用，該一號瓶、二號瓶、三號瓶、四號瓶和五號瓶中分別得到濃度為5μg/kg的一號標準液、濃度為10μg/kg的二號標準液、濃度為25μg/kg的三號標準液、濃度為50μg/kg的四號標準液和濃度為100μg/kg的五號標準液；

所述標準曲線制備工序中，將濃度為5μg/kg的一號標準液、濃度為10μg/kg的二號標準液、濃度為25μg/kg的三號標準液、濃度為50μg/kg的四號標準液和濃度為100μg/kg的五號標準液均通過標準液處理步驟得到工作標準曲線制備樣液，該工作標準曲線制備樣液均通過標準液檢測步驟得到工作標準曲線方程；所述標準液處理步驟中，稱取2g±0.02g標準液置于50ml塑料離心管中，向50ml塑料離心管中加入5ml水混合均勻，再向50ml塑料離心管中加入300μl氨水混合均勻，然后向50ml塑料離心管中加人10mL乙腈并用力振搖3-5min，使標準液完全溶解，再向50ml塑料離心管中加入8g無水硫酸鈉并用力振搖3-5min，然后在轉速為6000rpm的條件下離心5min后，50ml塑料離心管中分為標準一次上清液和標準一次殘渣，吸取50ml塑料離心管中的標準一次上清液后，再向50ml塑料離心管中加入5ml乙腈并用力振搖提取1-3min，在轉速為6000rpm的條件下離心5min后，50ml塑料離心管中分為標準二次上清液和標準二次殘渣，吸取50ml塑料離心管中的標準二次上清液，將標準一次上清液和標準二次上清液合并成為標準總上清液；向標準總上清液中加入5ml正丙醇，在40℃的條件下減壓濃縮至干得到標準上清液殘渣；向標準上清液殘渣中加入10ml體積百分比為50%的乙腈溶液后進行超聲波溶解，得標準溶解液；取HLB小柱，并用5ml甲醇和5ml水對HLB小柱進行活化，將上述標準溶解液用0.22μm的濾膜過濾至10ml注射器中作為標準樣液，該注射器接HLB小柱，使標準樣液自然速度過HLB小柱，再用3ml水對HLB小柱進行洗柱，然后真空抽干HLB小柱10min；用10ml乙腈對HLB小柱進行洗脫并收集標準洗脫液，該標準洗脫液在40℃的條件下減壓濃縮至干得到標準洗脫液殘渣，向標準洗脫液殘渣中加入1ml體積百分比為80%的乙腈溶液，待標準洗脫液殘渣完全溶解后通過孔徑為0.22μm的濾膜過濾得到標準洗脫樣液，用標準洗脫樣液進行上機檢測，在LC/MS/MS中標準洗脫樣液的進樣量為20μl；所述標準液檢測步驟中，檢測儀器的條件為：液相色譜采用的色譜柱為intersil?ODS?C8-3?150mm×2.1mm×3μm或相當者，進樣量為20μl，流動相采用含體積百分比為0.1%甲酸的甲醇為有機相，以含體積百分比為0.1%的甲酸水溶液（含0.5mmoL/L乙酸銨）為水相；質譜條件中的TEM為200.00℃，輔助加熱氣GS1為60.00，干燥氣GS2為50.00，氣簾氣CUR為10.00，碰撞氣CAD為5.00，電噴霧電壓IS為4500.00V，ihe為ON；將制備好的各標準樣液進樣，得到工作標準曲線方程y=kx+b，其中，y表示峰面積，x表示濃度，k和b表示回歸方程中的系數，該工作標準曲線方程中的r>0.99，r表示回歸方程中的相關系數；

所述樣品處理工序中，稱取2g±0.02g蜂王漿樣品置于50ml塑料離心管中，向50ml塑料離心管中加入5ml水混合均勻，再向50ml塑料離心管中加入300μl氨水混合均勻，然后向50ml塑料離心管中加人10mL乙腈并用力振搖3-5min，使蜂王漿樣品完全溶解，再向50ml塑料離心管中加入8g無水硫酸鈉并用力振搖3-5min，然后在轉速為6000rpm的條件下離心5min后，50ml塑料離心管中分為一次上清液和一次殘渣，吸取50ml塑料離心管中的一次上清液后，再向50ml塑料離心管中加入5ml乙腈并用力振搖提取1-3min，在轉速為6000rpm的條件下離心5min后，50ml塑料離心管中分為二次上清液和二次殘渣，吸取50ml塑料離心管中的二次上清液，將一次上清液和二次上清液合并成為總上清液；向總上清液中加入5ml正丙醇，在40℃的條件下減壓濃縮至干得到上清液殘渣；向上清液殘渣中加入10ml體積百分比為50%的乙腈溶液后進行超聲波溶解，得溶解液；取HLB小柱，并用5ml甲醇和5ml水對HLB小柱進行活化，將上述溶解液用0.22μm的濾膜過濾至10ml注射器中作為樣液，該注射器接HLB小柱，使樣液自然速度過HLB小柱，再用3ml水對HLB小柱進行洗柱，然后真空抽干HLB小柱10min；用10ml乙腈對HLB小柱進行洗脫并收集洗脫液，該洗脫液在40℃的條件下減壓濃縮至干得到洗脫液殘渣，向洗脫液殘渣中加入1ml體積百分比為80%的乙腈溶液，待洗脫液殘渣完全溶解后通過孔徑為0.22μm的濾膜過濾得到洗脫樣液，用洗脫樣液進行上機檢測，在LC/MS/MS中洗脫樣液的進樣量為20μl；

所述樣品檢測工序中，檢測儀器的條件為：液相色譜采用的色譜柱為intersil?ODS?C8-3?150mm×2.1mm×3μm或相當者，進樣量為20μl，流動相采用含體積百分比為0.1%甲酸的甲醇為有機相，以含體積百分比為0.1%的甲酸水溶液（含0.5mmoL/L乙酸銨）為水相；質譜條件中的TEM為200.00℃，輔助加熱氣GS1為60.00，干燥氣GS2為50.00，氣簾氣CUR為10.00，碰撞氣CAD為5.00，電噴霧電壓IS為4500.00V，ihe為ON；將制備好的樣液進樣，通過計算式X=C（V/m）分別計算得到蜂王漿中氟胺氰菊酯、三唑醇和蠅毒磷的殘留量，計算式中的X表示樣液中被測組分的含量，單位為微克每千克(μg/kg)，C表示從工作標準曲線方程上得到的被測組分溶液濃度，單位為微克每千克(μg/kg)，V表示樣品進樣液定容體積，單位為毫升(mL)，m表示蜂王漿樣品的質量，單位為克(g)。