[發明專利]一種海洋青霉菌菌株及其應用

無效

• 申請號: 201110206332.1
• 申請日: 2011-07-22
• 公開（公告）號: CN102268395A
• 公開（公告）日: 2011-12-07
• 發明（設計）人: 吳綿斌;王明璐;姚善涇
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A61K35/74;A61P31/04;C12R1/80
• 代理公司: 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224
• 代理人: 胡紅娟

技術領域

本發明涉及生物工程技術領域，具體涉及一種海洋青霉菌菌株及其應用。

背景技術

海洋青霉是一類廣泛存在于海洋的好氧性真菌，長期以來青霉一直用作檸檬酸、延胡索酸、葡萄糖酸、抗生素的工業生產菌。海洋微生物所處的特殊環境，使其很大程度上演變成新的種群或具有新的特殊生理功能的亞種，形成了陸生微生物所不具有的特性。微生物是開發研制抗生素及其他生理活性物質的重要資源。近幾年來，深部真菌病發生率有明顯的上升趨勢。

隨著從海洋真菌發現新化合物速率不斷增加，人們希望通過對海洋真菌的研究開發，獲得更多的新型生物活性物質。在對海洋真菌的分離鑒定中目前沿用了傳統的分離鑒定方法，即通過表型特征和細胞形態學的觀察，對真菌生理生化反應和細胞組成成分結構進行比較分析來實現分類鑒定。隨著生物化學、遺傳學以及分子生物學、生物信息學等相關學科的發展，同時，也是海洋真菌分類學自身發展的客觀要求，分子生物學鑒定方法被引入海洋真菌的菌種鑒定中，使菌種的鑒定在以形態特征和生理生化特征為基礎的鑒定上更加準確、可靠。

真菌的核糖體DNA內轉錄間隔區ITS(internal?transcribed?spacer)位于18S和5.8S?rDNA(ITS1)以及5.8S和28S?rDNA(ITS2)之間，是中度保守區域，長度大約在550～750bp。由于ITS區不加入成熟核糖體，因此在進化過程中承受的自然選擇壓力非常小，能容忍更多的變異，表現為種內菌株間相對保守，但在種間的差異非常明顯，這種特點使其非常適用于對真菌物種的分子鑒定以及屬內物種間或種內差異較明顯的菌群間的系統發育關系分析，即使是親緣關系非常接近的兩個種都能在ITS序列上表現出差異，顯示其最近的進化特征。研究表明，ITS片段的進化速率是18s?rDNA的10倍，這就是ITS序列在微生物種類鑒定和群落分析的理論基礎。

發明內容

本發明提供了一種海洋青霉菌菌株，具有很好的抑制真菌的作用，尤其對金黃色葡萄球菌具有強烈的抑菌作用，對黑曲霉，白色假絲酵母，大腸桿菌等也具有很好的抑制效果，對于真菌病的治療具有重要意義。

一種海洋青霉菌菌株，命名為灰黃青霉(Penicillium?griseofulvum)zju87，保藏在位于北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微生物研究所的中國普通微生物菌種保藏管理中心，保藏日期為2011年5月19日，保藏號為CGMCC?No.4888。

所述的灰黃青霉zju87的ITS的堿基序列如SEQ?ID?NO.1所示。

所述的灰黃青霉zju87分離自浙江東海海泥，在常溫和篩選培養基上生長良好，菌落表面呈灰綠色，反面呈淺黃色，菌落在培養第二天開始產孢子，并在第三天完全成熟。

本發明還提供了上述灰黃青霉zju87在抑制金黃色葡萄球菌生長中的應用。

通過對灰黃青霉zju87進行抑菌試驗，發現該菌株對金黃色葡萄球菌(Staphycococcus?aureus)具有強烈的抑菌作用，同時還對黑曲霉(Aspergillus?niger)，白色假絲酵母(Candida?albicans)，大腸桿菌(Escherichia?coli)等也具有很好的抑制效果；通過對灰黃青霉zju87的形態觀察、培養特征及ITS序列分析，灰黃青霉zju87具備典型的青霉屬形態特征，ITS堿基序列與灰黃青霉(Penicillium?griseofulvum?strain?091402)的同源性為99％。

附圖說明

圖1是本發明海洋青霉菌菌株的形態學結構特征圖；

圖2是本發明海洋青霉菌菌株的ITS序列PCR產物的電泳檢測圖。

(其中M：DL3000?Marker；1：海洋青霉菌菌株的ITS序列)

具體實施方式

篩選/種子培養基(g/L)：葡萄糖10、可溶性淀粉10、蛋白胨2、酵母膏1、FeSO₄?0.01、海水/蒸餾水(3/2)、pH7.2～7.5；

發酵培養基(g/L)：可溶性淀粉20、黃豆餅粉2、酵母膏1、K₂HPO₄1、FeSO₄?0.01、MgSO₄?0.5、海水/蒸餾水(3/2)、pH7.2～7.5；

金黃色葡萄球菌培養基(g/L)：蛋白胨10、牛肉膏3、瓊脂粉20、NaCl?5、pH?7.4；