[發(fā)明專利]通過添加槐糖脂進(jìn)行誘導(dǎo)發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110206118.6
• 申請日: 2011-07-22
• 公開（公告）號: CN102250859A
• 公開（公告）日: 2011-11-23
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 徐勇虎;劉云;李睿穎;國華;胡婭君;韓慧;王曉瓊;范婷
• 申請（專利權(quán)）人: 天津?qū)嵃l(fā)中科百奧工業(yè)生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12N9/42
• 分類號: C12N9/42;C12R1/885
• 代理公司: 天津市三利專利商標(biāo)代理有限公司 12107
• 代理人: 劉英蘭

1.一種通過添加槐糖脂進(jìn)行誘導(dǎo)發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶的方法，其特征在于實施步驟如下：

（1）種子培養(yǎng)

種子培養(yǎng)基組成包括，單位1L：纖維素10g，酵母抽提物10g，甘油10g，(NH₄)₂SO₄?1.4?g，KH₂PO_4?2g，CaCl₂·2H₂O?0.4g，MgSO₄·7H₂O?0.3?g，F(xiàn)eSO₄·7H₂O?0.005?g，CoCl₂·6H₂O?0.0037?g，MnSO₄·H₂O?0.0016g，ZnSO₄·7H₂O?0.0014?g，用蒸餾水定容至1L，pH值5.0；所用菌種：里氏木霉TJZKBIO956；首先將培養(yǎng)好的里氏木霉菌種接種到滅過菌的種子培養(yǎng)基中，在28-30℃培養(yǎng)，培養(yǎng)時間為68-72h，即得種子液；?

（2）發(fā)酵培養(yǎng)基滅菌

發(fā)酵培養(yǎng)基經(jīng)121℃，20min滅菌后，pH為5.0，冷卻至28-30℃；發(fā)酵培養(yǎng)基組成包括，單位1L：纖維素50g，酵母抽提物10g，?(NH₄)₂SO₄?1.4?g，KH₂PO_4?2g，CaCl₂·2H₂O?0.4g，MgSO₄·7H₂O?0.3?g，F(xiàn)eSO₄·7H₂O?0.005?g，CoCl₂·6H₂O?0.0037?g，MnSO₄·H₂O?0.0016g，ZnSO₄·7H₂O?0.0014?g，用蒸餾水定容至1L，pH值5.0；

（3）發(fā)酵

將種子液以5%-10%的接種量轉(zhuǎn)移至滅菌后的5L發(fā)酵罐中，發(fā)酵罐的裝液量為3L，控制發(fā)酵溫度為28-30℃，pH5.0，發(fā)酵40h后每隔2h取樣測定菌體濃度；

（4）槐糖脂滅菌

分別使用發(fā)酵制備的純度為95%的槐糖脂和濃度為150g/L的槐糖脂發(fā)酵液作為誘導(dǎo)劑，均用自來水溶解分別配制成終濃度為10g/L的溶液，在121℃滅菌20min后，冷卻至28-30℃；

（5）槐糖脂誘導(dǎo)

發(fā)酵罐經(jīng)45-48h發(fā)酵后，菌體達(dá)到對數(shù)生長后期，此時一次性添加槐糖脂溶液至發(fā)酵液中，使其終濃度為1g/L，或者進(jìn)行間歇性補(bǔ)加，連續(xù)補(bǔ)加3d，一天中分四次補(bǔ)加槐糖脂，每次間隔時間均為2h，每天補(bǔ)加槐糖脂的間隔時間為16h，使發(fā)酵液中槐糖脂的終濃度為1g/L；

（6）纖維素酶粗提取

整個發(fā)酵時間持續(xù)6d，發(fā)酵結(jié)束后發(fā)酵液經(jīng)過濾布過濾，濾液經(jīng)過0.1Mpa，55℃減壓濃縮，后進(jìn)行噴粉干燥，噴粉時進(jìn)料口溫度為135℃，出料口溫度為60℃，得到纖維素酶粗制品；纖維素酶的活力使用濾紙酶活（FPA）測定法測定，酶活為5000-5100?IU。