[發明專利]一種綿羊支原體肺炎抗性基因型的篩選方法

無效

• 申請號: 201110206091.0
• 申請日: 2011-07-22
• 公開（公告）號: CN102277425A
• 公開（公告）日: 2011-12-14
• 發明（設計）人: 趙宗勝;張紅梅;賈斌;趙鳳;余鵬;張慧;王建梅;劉賢俠
• 申請（專利權）人: 趙宗勝
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種綿羊支原體肺炎抗性基因型的篩選方法，其特征是：綿羊支原體肺炎抗性基因的多態性分析及提取篩選，具體篩選包括以下方法：

(1)樣品采集和綿羊基因組DNA的提取；

(2)對MBL外顯子1和4、內含子1和2逐段進行多態性分析，設計了7對引物，進行PCR擴增，篩選出與MBL水平相關的基因型21種，其中外顯子1上有4種基因型，即AA、BB、CC和BC型，含5個突變位點，分別位于第27、41、43、83、105位點，其中g.27T＞C和g105C＞T為同義突變，g41T＞A、Val14?Glu，g43G＞A、Val15?Met，g83A＞G、Glu28?Gly3處為錯義突變；外顯子4上有3種基因型，即GG、GH和HH型，含5個突變位點，分別位于第3235、3243、3257、3331、3334位點，其中g.3235T＞C，g.3331C＞T，g.3334C＞T為同義突變，g.3243A＞G、Glu?181?Gly，g.3257G＞A、Gly?186?Ser、2處為錯義突變；內含子1上有3種基因型，含AA、BB、AB型，1個突變位點，位于第288位點；內含子2上有11種基因型，包括PP、OP、CC、CD、DD、EE、EF、FF、GG、GH、HH型，含3個突變位點，分別位于第1091、1096、1784位點，均為同義突變位點；

(3)進行綿羊支原體肺炎EILSA抗體水平檢測，以外顯子1的多態性分析為基礎，對同一基因型綿羊支原體肺炎陰性和陽性不同個體進行差異顯著性分析，篩選出綿羊支原體肺炎抗性基因型和易感性基因型；

(4)以外顯子1的多態性分析為基礎，篩選出中國美利奴羊四種不同MBL基因型，即BB型、BC型、CC型和DD型各9只，建立供試群體，EILSA檢測群體MBL水平，結果顯示CC型MBL血清水平最高，BB、BC次之，DD型MBL血清水平最低，預測CC型為抗性組，DD型為易感組，人工感染綿羊肺炎支原體，結果抗性組中發病2只，未發病7只；易感組中發病7只，未發病2只，對照組均未發病，BC組中發病5只，未發病5只；BB組中發病5只，未發病4只，表明抗性組綿羊支原體肺炎的感染率顯著低于易感組。