[發(fā)明專利]一種黃色短桿菌質(zhì)粒提取的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110206045.0
• 申請日: 2011-07-22
• 公開（公告）號: CN102321610A
• 公開（公告）日: 2012-01-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王煒;包慧芳;王寧;楊慧;莫海燕
• 申請（專利權(quán)）人: 新疆農(nóng)業(yè)科學(xué)院微生物應(yīng)用研究所
• 主分類號: C12N15/10
• 分類號: C12N15/10
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種黃色短桿菌質(zhì)粒提取方法，其特征在于，所述的具體提取步驟如下：

(1)將保存于斜面的含外源質(zhì)粒的黃色短桿菌劃線接種于含有20mg/ml氯霉素和100mg/ml鏈霉素的MPA平板培養(yǎng)基上，所述的MPA平板培養(yǎng)基成分為，牛肉膏10％(w/v)，蛋白胨0.5％(w/v)，葡萄糖2％(w/v)，瓊脂1.5％(w/v)；

(2)待菌落長出后挑取單菌落接種于20ml液體培養(yǎng)基中，接種時(shí)加入終濃度為0.4％(w/v)的異煙肼，終濃度為3％(w/v)的甘氨酸，30℃，200rpm振蕩培養(yǎng)過夜；所述的液體培養(yǎng)基成分為，蔗糖2.5％(w/v)，酵母粉2％(w/v)，(NH₄)₂SO₄2％(w/v)，M_gSO₄·7H₂O?0.02％(w/v)，KH₂PO₄0.05％(w/v)；

(3)取5ml菌液，4℃，10000rpm離心2分鐘，棄上清，吸盡殘留液體；

(4)將菌體重懸于800μl溶菌酶溶液，充分混勻，30℃水浴2小時(shí)，其間時(shí)常翻轉(zhuǎn)離心管；

(5)將步驟(4)離心管中加入200μl?0.5M的EDTA，pH?8.0，充分混勻，30℃溫浴30分鐘；

(6)將步驟(5)離心管中加入1ml?2％的SDS及1ml?0.2M的NaOH，快速混勻，56℃溫浴10分鐘；

(7)將步驟(6)離心管中加入1.5ml?KAc溶液，充分混勻，冰浴3分鐘；

(8)在4℃，12000rpm離心5分鐘，將上清轉(zhuǎn)移至一新離心管，加入與上清液等體積的酚∶氯仿(V/V，1∶1)，混勻，4℃，12000rpm離心5分鐘；

(9)將上清轉(zhuǎn)移至另一離心管中，加入與上清液等體積的異丙醇，混勻，室溫靜置15分鐘；

(10)在室溫條件，12000rpm離心5分鐘，去上清，所得沉淀即為質(zhì)粒；

(11)70％乙醇洗滌兩次，室溫晾干后加入3ml?TE，pH?8.0，溶解質(zhì)粒，保存于-20℃?zhèn)溆谩?/p>