[發(fā)明專利]一種青霉菌源殼聚糖酶基因及其制備方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110205984.3
• 申請(qǐng)日: 2011-07-21
• 公開（公告）號(hào): CN102250858A
• 公開（公告）日: 2011-11-23
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱旭芬;吳敏;張文武
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N9/42
• 分類號(hào): C12N9/42;C12N15/56;C12N15/63;C12N1/21;C12N1/19;C12N5/10;C12N15/10;C12R1/19;C12R1/80
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務(wù)所有限公司 33100
• 代理人: 徐飛虎;徐關(guān)壽

1.一種殼聚糖酶蛋白，是具有如下(1)或(2)特征的蛋白質(zhì)：

(1)、其氨基酸序列與Seq?ID?NO.2所示序列一致；

(2)、將Seq?ID?NO.2的氨基酸殘基序列經(jīng)過(guò)一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代、缺失和/或添加且具有殼聚糖酶活性的由(1)衍生的蛋白質(zhì)。

2.編碼權(quán)利要求1所述殼聚糖酶蛋白的DNA分子，其核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示；或?yàn)閷?duì)SEQ?ID?NO.1所示的核苷酸序列進(jìn)行替換、添加和/或缺失一個(gè)或幾個(gè)核苷酸從而獲得編碼能基本保留殼聚糖酶蛋白生物學(xué)活性的DNA分子。

3.攜帶有權(quán)利要求2所述DNA分子的載體。

4.一種宿主系統(tǒng)，其由權(quán)利要求3所述的載體經(jīng)轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染原核生物或真核生物宿主得到。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的宿主系統(tǒng)，其為細(xì)菌、酵母或哺乳動(dòng)物細(xì)胞。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的宿主系統(tǒng)，其為大腸桿菌E.coli。

7.一種從生產(chǎn)殼聚糖酶的菌株中克隆殼聚糖酶基因的方法，包括如下步驟：

(1)將已知的霉菌殼聚糖酶基因進(jìn)行序列比對(duì)，找到核心保守序列；

(2)設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物；

(3)以霉菌株基因組為模板，利用簡(jiǎn)并引物通過(guò)PCR法擴(kuò)增霉菌源殼聚糖酶部分基因片段；

(4)利用獲得的部分基因序列，設(shè)計(jì)巢式引物，通過(guò)反向PCR法獲取全長(zhǎng)殼聚糖酶基因。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于：所述步驟(1)中核心保守序列為NMDIDCD和YGIWGD。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于：所述步驟(2)中簡(jiǎn)并引物為DFP(5’-GCGGATCCAAYATGGAYATHGAYTGYGA-3’)和DRP(5’-GCGAAGCTTRTCDCCCCADATNCCRTA-3’)。

10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于：所述步驟(4)中巢式引物為FP1(5-CCA?GAG?CAC?GTT?GGC?ATC?AA-3)、FP2(5’-GGT?CTG?CAA?CAA?CAA?GCT?CAT?C-3’)、RP1(5-ACC?ATA?GTC?GGA?CTT?GAC?CT-3)和RP2(5’-GAG?TCG?ATG?CCG?TCT?TGA?TC-3’)。