[發(fā)明專利]一種人血液H-FABP納米金標(biāo)檢測(cè)試紙條及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110205264.7
• 申請(qǐng)日: 2011-07-21
• 公開（公告）號(hào): CN102298055A
• 公開（公告）日: 2011-12-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊笛;陳相健;卞智萍;顧春榮;郭智睿;徐縉丹;張雷;張寄南
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京博天科智生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N33/531
• 代理公司: 南京蘇高專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙) 32204
• 代理人: 楊曉玲

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)應(yīng)用領(lǐng)域，具體涉及一種人血液中心臟型脂肪酸結(jié)合蛋白（Heart-type?Fatty?Acid?Binding?Protein，H-FABP）納米金標(biāo)檢測(cè)試紙條及制備方法。?

背景技術(shù)

H-FABP存在于心肌細(xì)胞胞漿內(nèi)，含量豐富。心肌受損早期，心肌細(xì)胞膜完整性被破壞，H-FABP進(jìn)入血液。H-FABP在心肌受損后1-2h即可在血液中檢測(cè)到。由于H-FABP心肌特異性高于目前臨床常用的肌紅蛋白，因此H-FABP可成為一種重要的檢測(cè)急性心肌組織損傷的早期特異性標(biāo)志物。目前，生化標(biāo)志物的檢測(cè)已廣泛應(yīng)用于急性心肌梗死、不穩(wěn)定型心絞痛、急性心衰、心肌炎、心臟手術(shù)損傷評(píng)估、窒息新生兒心肌損傷等心肌損傷疾病的診斷、危險(xiǎn)度分層和預(yù)后評(píng)判。美國每年因懷疑性冠狀動(dòng)脈綜合征急診就醫(yī)病人達(dá)8000萬，其中45%左右與心臟相關(guān)，15%診斷為急性冠脈綜合征。我國急性冠狀動(dòng)脈綜合征的發(fā)病率約50/10萬，每年死于急性心肌梗死的人數(shù)超過100萬。因此，H-FABP檢測(cè)的應(yīng)用具有重要的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)效益。?

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明目的：針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，本發(fā)明的目的是提供一種人血液H-FABP納米金標(biāo)檢測(cè)試紙條，使其具有操作簡(jiǎn)便、靈敏度<7ng/mL、結(jié)果穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明的另一目的是提供上述檢測(cè)試紙條的制備方法。?

技術(shù)方案：為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：?

一種人血液H-FABP納米金標(biāo)檢測(cè)試紙條，包括設(shè)在固定板上依次相連的樣品墊（1）、金標(biāo)墊（2）、硝酸纖維素膜（3）和吸水紙（4）；在硝酸纖維素膜（3）上設(shè)有檢測(cè)線抗體（5）和質(zhì)控線抗體（6）；在金標(biāo)墊（2）上設(shè)有金標(biāo)抗體。

所述的金標(biāo)墊（2）為聚酯纖維膜制成的墊。?

所述的樣品墊（1）為玻璃纖維膜制成的墊。?

所述的金標(biāo)抗體為顯色抗體，檢測(cè)線抗體為捕捉抗體，顯色抗體與捕捉抗體為2株可互相配對(duì)形成夾心的抗人H-FABP單克隆抗體。?

所述的金標(biāo)抗體用40nm納米金殼標(biāo)記。?

一種制備人血液H-FABP納米金標(biāo)檢測(cè)試紙條的方法，包括以下步驟：?

（1）采用“種子”生長(zhǎng)法制備策略，以檸檬酸三鈉為穩(wěn)定劑和還原劑，制備出單分散的銀納米顆粒作為犧牲模板，通過置換反應(yīng)獲得膠體級(jí)、高分散的金納米殼（40nm）。

（2）調(diào)節(jié)納米金殼溶液pH8.0～8.5，加入顯色抗體（1株抗人H-FABP單克隆抗體）與納米金殼溶液反應(yīng)，離心得沉淀，重懸沉淀，得金標(biāo)抗體溶液；?

（3）將聚酯纖維膜預(yù)處理后，烘干，用金標(biāo)抗體溶液噴印；

（4）用捕捉抗體（1株抗人H-FABP單克隆抗體BT01）在已活化硝酸纖維膜上噴劃?rùn)z測(cè)線，真空干燥；然后用羊抗鼠IgG在已活化硝酸纖維膜上噴劃質(zhì)控線，真空干燥；

（5）按樣品墊、金標(biāo)墊、硝酸纖維膜、吸水紙順序粘貼在單面壓敏膠的塑料板上，切割，裝入塑料卡，包裝；

其中，采用2株可互相形成夾心配對(duì)的抗人H-FABP抗體，其中1株作為捕捉抗體BT01，1株作為顯色抗體BT02；用40nm納米金殼標(biāo)記顯色抗體。

上述人血液H-FABP納米金標(biāo)檢測(cè)試紙條在檢測(cè)人血液中H-FABP的應(yīng)用。?

有益效果：本發(fā)明的人血液H-FABP納米金標(biāo)檢測(cè)試紙條，使用中空的金納米殼代替目前膠體金試紙條常用的球形納米顆粒。應(yīng)用于人H-FABP檢測(cè)，特異性高，由于中空金納米殼所呈現(xiàn)的顏色（墨綠色），在基于白色背景下能比球形金納米顆粒（暗紅色）產(chǎn)生更好的分辨光信號(hào)。而且由于中空金殼的重量輕于同樣大小的實(shí)心納米金顆粒（平均直徑均為40nm），其免疫層析的速度加快，有利于試紙的快速檢測(cè)。結(jié)果易觀察，靈敏度達(dá)到7ng/mL，15-30min內(nèi)就能判讀結(jié)果，具有良好的穩(wěn)定性和重復(fù)性，操作簡(jiǎn)便，無需特殊儀器設(shè)備，可應(yīng)用于急性心肌梗死和急性心肌損傷的早期診斷，尤其適宜在廣大基層醫(yī)院推廣和應(yīng)用。?

附圖說明

圖1是試紙條的結(jié)構(gòu)示意圖。?

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說明。?

實(shí)施例1?

（1）納米金殼溶液的制備：