[發明專利]流式微球法對SLE的Sm-RNP抗體檢測試劑盒的制備

無效

• 申請號: 201110204803.5
• 申請日: 2011-07-21
• 公開（公告）號: CN102360016A
• 公開（公告）日: 2012-02-22
• 發明（設計）人: 林遠;謝冉;張曉軍;王月華
• 申請（專利權）人: 南京工業大學
• 主分類號: G01N33/96
• 分類號: G01N33/96;G01N33/543;G01N33/533
• 代理公司: 暫無信息
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技術領域

本發明涉及一種流式微球法Sm-RNP抗體檢測試劑盒的制備和應用，屬于醫學免疫分析技術領域。

背景技術

系統性紅斑狼瘡(systemic?lupusery?thematosus，SLE)是一種以大量自身抗體形成為特征，導致多系統、多器官損害的慢性系統性自身免疫性疾病。SLE是一種常見的風濕性疾病，發病率為1/1000，好發于育齡女性，男女之比約為1∶7～10，非生育年齡女性優勢不明顯。主要病因可能與遺傳、環境因素和雌激素有關，已有研究報道年齡是一大危險因素，尤其以青年女性發病最為常見。發病機制主要與免疫調節異常、大量的自身抗體以及免疫復合物的形成有關，目前，具體的發病機制目前尚不清楚。

SLE血清學檢查是SLE普查和輔助診斷的重要方法。目前，醫院實驗室內初步診斷患者的血清學方法主要為酶聯免疫吸附試驗(enzyme?linked?immunosorbent?assay，ELISA)檢測患者抗核抗體譜。ELISA法為確診試驗，特異性高，但是靈敏度低、操作繁瑣、不適于批量標本檢測。研究新的快速、簡便、敏感且特異的診斷方法，對SLE早期發現與治療有重要意義。

流式細胞細胞學檢測具有傳統細胞學檢測方法不可替代的技術優勢。近年來在該技術基礎上發展起來的流式微球載體技術，越來越多的應用于生物分子學檢測，包括蛋白質、多肽和核糖核酸。流式微球載體技術是在高聚分子微球作為載體，在其表面進行免疫吸附反應，通過流式細胞儀測量示蹤物的熒光強度，具有高靈敏度、特異性和穩定性的優點。

發明內容

發明目的：本發明所要解決的技術問題是提供一種基于流式微球載體技術的Sm-RNP抗體檢驗試劑盒的檢測，借助流式細胞儀檢測對SLE患者的Sm-RNP抗體定性檢驗以及靈敏度與特異度檢測。

技術方案：為解決上述技術問題，本發明的思路是使用熒光標記區分不同抗體的方法與使用抗體標記特異性識別蛋白的方法組合，達到用流式細胞儀進行定性和定量分析的目的。

流式微球法Sm-RNP抗體檢測試劑盒包括：Sm-RNP抗原包被的微球載體、質控血清、熒光標記抗體和樣本稀釋液。

流式微球法Sm-RNP抗體檢測試劑盒的制備方法如下：

1、微球載體：將重組Sm-RNP抗原與活化的高聚分子微球按規定比例混合，2-8℃孵育4小時；用PBS緩沖液洗滌離心(3500rpm)3次后，棄上清液保留沉淀物；加入1％的牛血清白蛋白封閉，孵育30分鐘，加PBS和防腐劑至適當濃度，4℃保存。

2、質控血清：陰性對照血清是經國家標準品或國家標準品標定的參考品測定為Sm-RNP抗體陰性的血清，陽性對照血清是經國家標準品或國家標準品標定的參考品測定為Sm-RNP抗體陽性的血清。

3、熒光標記抗人抗體：熒光標記抗人抗體為FITC標記的羊或兔抗人抗體。

4、樣本稀釋液為含有1％小牛血清白蛋白(BSA)的磷酸緩沖液(PBS)。

流式微球法Sm-RNP抗體檢測試劑盒的檢測方法如下：

1、定性檢測是用陰性、陽性對照血清為參照，根據待測樣品的熒光強度判斷得病與否，強度大于或等于陰性檢測值的2.1倍時為陽性，小于時為陰性。

2、靈敏度與特異度檢測，采用四線表格進行計算。

上述所有檢測均借助流式細胞儀。

有益效果：本發明所述的流式微球法Sm-RNP抗體檢測法具有以下優點：

1、與傳統ELISA法相比，顯著提高了檢測靈敏度。

2、使SLE患者的血清學檢測和其它疾病血清學檢測同步進行，形成高通量分析。

3、降低檢測成本，減少分次檢測帶來的系統誤差。

附圖說明：

圖1為FCMA檢測血清Sm-RNP抗體的陰性陽性對照。

具體實施方式：

實施例1：對SLE患者的Sm-RNP抗體定性檢測。