[發明專利]鐵皮石斛的雜交育種方法

無效

• 申請號: 201110204407.2
• 申請日: 2011-07-21
• 公開（公告）號: CN102388797A
• 公開（公告）日: 2012-03-28
• 發明（設計）人: 梁鈞淞;玉桂成;陳劍成;吳俊;黃光蘭;覃耀銳;黃麗丹;李建凡
• 申請（專利權）人: 玉林市林業科學研究所
• 主分類號: A01H1/02
• 分類號: A01H1/02
• 代理公司: 玉林市振盛專利商標代理事務所 45109
• 代理人: 吳安儀

技術領域

本發明涉及一種珍稀藥用植物種苗繁殖方法，具體地說，涉及一種鐵皮石斛(Dendrobium?officinale?Kimura?et?Migo)的雜交育種和種苗繁殖方法。

背景技術

鐵皮石斛(Dendrobium?officinale?Kimura?et?Migo)又叫黑節草、鐵皮蘭等，為蘭科多年生附生草本植物，主要分布于秦嶺和長江流域以南地區，并且主要集中在山區中的樹蔭下或石縫中。鐵皮石斛是我國常用的名貴中藥，具有獨特的藥用價值，具有滋陰清熱、生津益胃、潤肺止咳等功效。現代藥理研究表明，鐵皮石斛還具有抗腫瘤、抗衰老、增強人體免疫力及擴張血管的作用。但由于人們對鐵皮石斛的過度采挖而使野生資源枯竭，現鐵皮石斛已成為國家重點保護的藥材品種之一。

由于鐵皮石斛分布范圍較廣，并且各個分布區中又相對比較集中，加上鐵皮石斛主要以無性方式進行繁殖，造成鐵皮石斛在種內形成了許多地域性種群。加強不同種群之間的優勢互補，實現雜交優勢技術在鐵皮石斛中的應用對解決缺乏優質鐵皮石斛種苗的現狀具有重要的理論與實踐意義。

發明內容

本發明的目的在于提供出一種萌發率高、成苗快、種苗品質好的高效率的鐵皮石斛雜交育種的方法。

本發明人通過將選好的兩種鐵皮石斛雜交親本進行人工授粉，得到的果實在基本成熟而未開裂時在種子萌發培養基上進行無菌播種，種子萌發后再轉移到壯苗培養基上培養，形成的試管苗經過自然光照下煉苗后出瓶栽培，試管苗移栽成活率達到95％以上，由于靠本發明人利用了培養基上培養出壯苗，經長期摸索終于找到適合壯苗培養基作為發明點，從而實現了本發明的目的。

本發明的鐵皮石斛雜交育種方法，其特征在于包括以下的步驟：

(1)人工授粉：選定用于雜交的兩種鐵皮石斛親本，采集父本的花粉授于母本的柱頭上，兩個親本互為父、母本進行正反交；

(2)無菌播種：當鐵皮石斛雜交種授粉后，在果實發育基本成熟而果實未開裂時，將該果實作為外植體用70％-80％酒精消毒20-60秒后，用無菌水沖洗2-5次后置于0.1％-0.2％的升汞中消毒15-30分鐘，再用無菌水漂洗4-6次后切開果實，用接種針將黃白色粉末狀胚接種到種子萌發培養基上培養，所述的種子萌發培養基每升含蛋白胨0.5-4g，椰子汁50-150ml，蔗糖15-30g，瓊脂3.5-5g，肌醇40-100mg，鹽酸硫胺4.5-12mg，甘氨酸1.5-4.0mg，煙酸1.0-2.5mg，D-泛酸鈣0.9-2.5mg，抗壞血酸0.8-2.0mg，吡哆辛鹽酸0.4-1.5mg，生物素0.09-0.25mg，其余為MS培養基中的大量元素和微量元素成分；

(3)壯苗培養：將無菌播種獲得的小植株接種到壯苗培養基上培養，所述的壯苗培養基每升含蛋白胨0.5-3g，水解酪蛋白0.1-0.5g，蔗糖15-30g，瓊脂3.5-5g，α-萘乙酸0.5-3.0mg，肌醇40-100mg，鹽酸硫胺4.5-12mg，甘氨酸1.5-4.0mg，煙酸1.0-2.5mg，D-泛酸鈣0.9-2.5mg，抗壞血酸0.8-2.0mg，吡哆辛鹽酸0.4-1.5mg，生物素0.09-0.25mg，香蕉勻漿50-150g，胡蘿卜汁10-50g，蘋果汁10-50g，馬鈴薯汁10-50g，其余為MS培養基中的大量元素和微量元素成分；

(4)試管苗移栽：當小植株形成的植株長至4-6厘米時，將培養瓶轉移到自然光下煉苗7-14天，然后將其從組培瓶中取出，洗凈根部的培養基，移至水苔或泥炭和蘭石按體積比1∶1的混合基質中栽培，得到種苗；

在上述(2)-(3)各步驟中所用的培養基均為PH5.4～5.8，培養溫度28～30℃，每天光照10～12小時，光照度1500～2000lx。

在上述人工授粉步驟中，如果選定用于雜交的兩種鐵皮石斛親本同時開花，可在花朵展開后3-5天內進行人工授粉，授粉選擇在16:00～17:30進行，授粉前先去除母本和父本的唇瓣，去除父本的藥帽，將父本的花粉粒授于母本的柱頭窩內，兩個親本可互為父、母本進行正反交；

如果所選定的兩個親本不在同一時間開花時，則可以先開花的鐵皮石斛親本為父本，后開花的鐵皮石斛親本為母本，先采集父本的花粉用密封消毒的塑料管室溫保存，鐵皮石斛花粉保存時間可達1-3個月，當母本鐵皮石斛開花3-5天后，將有生命力的花粉授于母本的柱頭窩內，花粉的生命力可采用氯化三苯四氮唑染色法測定。

大部分鐵皮石斛在授粉后110-150天雜交果實成熟，一般鐵皮石斛雜交種子最佳的萌發期是在果實發育基本成熟而果實未開裂時。