[發明專利]一種超靈敏、定量免疫層析裝置及檢測方法

無效

• 申請號: 201110204157.2
• 申請日: 2011-07-20
• 公開（公告）號: CN102305854A
• 公開（公告）日: 2012-01-04
• 發明（設計）人: 湯凌霄;李金峰;付輝;王西麗
• 申請（專利權）人: 湯凌霄;深圳市易瑞生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/533;G01N33/531
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技術領域

本發明屬于生物醫學領域，具體涉及一種定性和定量檢測樣品中目標物質含量的免疫層析檢測裝置及檢測方法。

背景技術

免疫層析技術是上世紀80年代初期的一種簡便快速檢測技術，由該技術制成的免疫層析試紙條通常由以下幾部分組成：背襯及粘貼在背襯上的樣品墊、結合墊、纖維素膜、吸收墊等。檢測時，將樣品滴加到樣品墊上，樣品會通過毛細作用在層析條上遷移，在遷移的過程中，與結合墊上的標記物發生特異性反應，產生免疫復合物，該免疫復合物繼續遷移，與纖維素膜上檢測區域的相應抗原/抗體發生特異性結合，形成肉眼可見的檢測帶。現有的免疫層析試紙條產品常用的示蹤標記粒子有納米金、納米硒、乳膠等等，其中以納米金應用最為廣泛。目前，免疫層析試紙條產品已在疾病最為成熟的免疫層析產品已在醫學檢測、食品安全、藥物濫用等領域得到廣泛應用。

但是現有的免疫層析產品普遍存在以下缺點：1)不能定量檢測，只能定性檢測。2)由于示蹤粒子的信號弱、反應不完全等因素導致靈敏性低，限制了其在一些需要高靈敏檢測領域的應用。3)信號單一，不適合聯檢。

一些稀土元素(如：Eu³⁺、Sm³⁺、Dy³⁺、Tb³⁺等)與某些螯合劑形成的螯合物可在在外光激發下發射出明亮的特征性熒光。此類熒光具有壽命長、Stokes位移大、激發譜較寬而發射峰尖銳等特點。基于稀土元素螯合物作為標記物的時間分辨熒光分析技術(Time?resolved?fluoroisnmunoassay，TRFIA)以其高靈敏性等優勢，已在醫學檢測領域得到廣泛應用。用稀土元素螯合物制成的熒光納米顆粒除具有熒光壽命長、Stokes位移大、激發譜較寬而發射峰尖銳等特點外，還具有熒光信號更強、抗光漂白性更強、生物相容性好等突出優勢。

發明內容

本發明的目的旨在針對現有免疫層析技術的缺陷，提供一種靈敏度高、操作簡便的定性和定量免疫層析檢測裝置及檢測方法。

為了實現上述目的，本發明采取三種手段來提高檢測的靈敏性：1)以熒光納米顆粒作為標記物；2)用時間分辨定量檢測設備來進行超靈敏檢測；3)提供一種反應池，使免疫反應得到更為徹底進行。

本發明的一個技術方案是：

提供一種免疫層析檢測試紙條，該試紙條包括背襯，以及在背襯上依次搭接粘貼的樣品墊、硝酸纖維素膜及吸收墊，其中硝酸纖維素膜上噴涂有檢測區和參比區，還可有質控區。參比區噴涂有稀土熒光納米顆粒。通過測定檢測區的熒光信號強度與參比區熒光信號強度比值來實現定量檢測。

提供一種反應池，反應池內含有稀土熒光納米顆粒-抗體/抗原/半抗原/其它特異性結合物質的復合物及緩沖體系。所述的特異性結合物質是抗原、抗體、半抗原意外的特異性結合物質，如鏈霉親和素、生物素、蛋白A、蛋白G。

如上所述的免疫層析試紙條，其特征是參比區固定有稀土熒光納米顆粒。

如上所述稀土熒光納米顆粒，其特征是用聚合材料或氧化硅包裹或者吸附稀土元素(如：Eu³⁺、Sm³⁺、Dy³⁺、Tb³⁺等)與螯合劑形成的螯合物，該螯合物可以在紫外光激發下發射出明亮的特征性熒光。

如上所述的稀土熒光納米顆粒，其特征是顆粒粒徑在10nm-10000nm之間；

如上所述的反應池，其特征是稀土熒光納米顆粒與抗體/抗原/半抗原/其它特異性結合物質之間可以通過共價鍵、分子間作用力、疏水作用力等方式偶聯在一起。

如上所述的反應池，其特征是其中含有適合生物分子反應的緩沖體系，該緩沖體系的pH在1-13之間。

如上所述的反應池，其特征是內容物是凍干的粉末，還可以是液體。

本發明還提供了一種檢測方法，其特征是樣品中的目標物質首先在反應池內與抗原、抗體或其它結合物質發生充分反應。

如上所述的檢測方法，其特征是加入樣品后，樣品中的目標物質與反應池內的抗原、抗體或其它結合物質在15-60℃之間反應0-1h。

如上所述的檢測方法，其特征是目標物質與反應池內的抗體/抗原/半抗原/其它特異性結合物質-稀土熒光納米顆粒形成的復合物發生充分反應后，再用免疫層析試紙條進行檢測。

本發明與現有技術相比具有以下技術優勢：

1)用稀土熒光納米顆粒代替傳統的納米金、乳膠、納米硒等示蹤粒子，制備免疫層析試紙條，既適合定性檢測，又能進行定量檢測。

2)檢測靈敏性大幅度提高。