[發(fā)明專利]一種超靈敏、定量免疫層析裝置及檢測(cè)方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110204157.2
• 申請(qǐng)日: 2011-07-20
• 公開（公告）號(hào): CN102305854A
• 公開（公告）日: 2012-01-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 湯凌霄;李金峰;付輝;王西麗
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 湯凌霄;深圳市易瑞生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/558
• 分類號(hào): G01N33/558;G01N33/533;G01N33/531
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技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種定性和定量檢測(cè)樣品中目標(biāo)物質(zhì)含量的免疫層析檢測(cè)裝置及檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

免疫層析技術(shù)是上世紀(jì)80年代初期的一種簡便快速檢測(cè)技術(shù)，由該技術(shù)制成的免疫層析試紙條通常由以下幾部分組成：背襯及粘貼在背襯上的樣品墊、結(jié)合墊、纖維素膜、吸收墊等。檢測(cè)時(shí)，將樣品滴加到樣品墊上，樣品會(huì)通過毛細(xì)作用在層析條上遷移，在遷移的過程中，與結(jié)合墊上的標(biāo)記物發(fā)生特異性反應(yīng)，產(chǎn)生免疫復(fù)合物，該免疫復(fù)合物繼續(xù)遷移，與纖維素膜上檢測(cè)區(qū)域的相應(yīng)抗原/抗體發(fā)生特異性結(jié)合，形成肉眼可見的檢測(cè)帶。現(xiàn)有的免疫層析試紙條產(chǎn)品常用的示蹤標(biāo)記粒子有納米金、納米硒、乳膠等等，其中以納米金應(yīng)用最為廣泛。目前，免疫層析試紙條產(chǎn)品已在疾病最為成熟的免疫層析產(chǎn)品已在醫(yī)學(xué)檢測(cè)、食品安全、藥物濫用等領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。

但是現(xiàn)有的免疫層析產(chǎn)品普遍存在以下缺點(diǎn)：1)不能定量檢測(cè)，只能定性檢測(cè)。2)由于示蹤粒子的信號(hào)弱、反應(yīng)不完全等因素導(dǎo)致靈敏性低，限制了其在一些需要高靈敏檢測(cè)領(lǐng)域的應(yīng)用。3)信號(hào)單一，不適合聯(lián)檢。

一些稀土元素(如：Eu³⁺、Sm³⁺、Dy³⁺、Tb³⁺等)與某些螯合劑形成的螯合物可在在外光激發(fā)下發(fā)射出明亮的特征性熒光。此類熒光具有壽命長、Stokes位移大、激發(fā)譜較寬而發(fā)射峰尖銳等特點(diǎn)。基于稀土元素螯合物作為標(biāo)記物的時(shí)間分辨熒光分析技術(shù)(Time?resolved?fluoroisnmunoassay，TRFIA)以其高靈敏性等優(yōu)勢(shì)，已在醫(yī)學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。用稀土元素螯合物制成的熒光納米顆粒除具有熒光壽命長、Stokes位移大、激發(fā)譜較寬而發(fā)射峰尖銳等特點(diǎn)外，還具有熒光信號(hào)更強(qiáng)、抗光漂白性更強(qiáng)、生物相容性好等突出優(yōu)勢(shì)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的旨在針對(duì)現(xiàn)有免疫層析技術(shù)的缺陷，提供一種靈敏度高、操作簡便的定性和定量免疫層析檢測(cè)裝置及檢測(cè)方法。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取三種手段來提高檢測(cè)的靈敏性：1)以熒光納米顆粒作為標(biāo)記物；2)用時(shí)間分辨定量檢測(cè)設(shè)備來進(jìn)行超靈敏檢測(cè)；3)提供一種反應(yīng)池，使免疫反應(yīng)得到更為徹底進(jìn)行。

本發(fā)明的一個(gè)技術(shù)方案是：

提供一種免疫層析檢測(cè)試紙條，該試紙條包括背襯，以及在背襯上依次搭接粘貼的樣品墊、硝酸纖維素膜及吸收墊，其中硝酸纖維素膜上噴涂有檢測(cè)區(qū)和參比區(qū)，還可有質(zhì)控區(qū)。參比區(qū)噴涂有稀土熒光納米顆粒。通過測(cè)定檢測(cè)區(qū)的熒光信號(hào)強(qiáng)度與參比區(qū)熒光信號(hào)強(qiáng)度比值來實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。

提供一種反應(yīng)池，反應(yīng)池內(nèi)含有稀土熒光納米顆粒-抗體/抗原/半抗原/其它特異性結(jié)合物質(zhì)的復(fù)合物及緩沖體系。所述的特異性結(jié)合物質(zhì)是抗原、抗體、半抗原意外的特異性結(jié)合物質(zhì)，如鏈霉親和素、生物素、蛋白A、蛋白G。

如上所述的免疫層析試紙條，其特征是參比區(qū)固定有稀土熒光納米顆粒。

如上所述稀土熒光納米顆粒，其特征是用聚合材料或氧化硅包裹或者吸附稀土元素(如：Eu³⁺、Sm³⁺、Dy³⁺、Tb³⁺等)與螯合劑形成的螯合物，該螯合物可以在紫外光激發(fā)下發(fā)射出明亮的特征性熒光。

如上所述的稀土熒光納米顆粒，其特征是顆粒粒徑在10nm-10000nm之間；

如上所述的反應(yīng)池，其特征是稀土熒光納米顆粒與抗體/抗原/半抗原/其它特異性結(jié)合物質(zhì)之間可以通過共價(jià)鍵、分子間作用力、疏水作用力等方式偶聯(lián)在一起。

如上所述的反應(yīng)池，其特征是其中含有適合生物分子反應(yīng)的緩沖體系，該緩沖體系的pH在1-13之間。

如上所述的反應(yīng)池，其特征是內(nèi)容物是凍干的粉末，還可以是液體。

本發(fā)明還提供了一種檢測(cè)方法，其特征是樣品中的目標(biāo)物質(zhì)首先在反應(yīng)池內(nèi)與抗原、抗體或其它結(jié)合物質(zhì)發(fā)生充分反應(yīng)。

如上所述的檢測(cè)方法，其特征是加入樣品后，樣品中的目標(biāo)物質(zhì)與反應(yīng)池內(nèi)的抗原、抗體或其它結(jié)合物質(zhì)在15-60℃之間反應(yīng)0-1h。

如上所述的檢測(cè)方法，其特征是目標(biāo)物質(zhì)與反應(yīng)池內(nèi)的抗體/抗原/半抗原/其它特異性結(jié)合物質(zhì)-稀土熒光納米顆粒形成的復(fù)合物發(fā)生充分反應(yīng)后，再用免疫層析試紙條進(jìn)行檢測(cè)。

本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有以下技術(shù)優(yōu)勢(shì)：

1)用稀土熒光納米顆粒代替?zhèn)鹘y(tǒng)的納米金、乳膠、納米硒等示蹤粒子，制備免疫層析試紙條，既適合定性檢測(cè)，又能進(jìn)行定量檢測(cè)。

2)檢測(cè)靈敏性大幅度提高。