[發明專利]桑葛制劑中總黃酮類和總生物堿類成分的指紋圖譜構建方法及質量檢測方法

有效

• 申請號: 201110204127.1
• 申請日: 2011-07-20
• 公開（公告）號: CN102890124A
• 公開（公告）日: 2013-01-23
• 發明（設計）人: 段震文;郭樹仁;薛嵐
• 申請（專利權）人: 北京北大維信生物科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 北京康信知識產權代理有限責任公司 11240
• 代理人: 吳貴明

1.一種桑葛制劑中總黃酮類成分和總生物堿類成分指紋圖譜的構建方法，其特征在于，所述方法包括：

a)將所述桑葛制劑制備成液相分離用桑葛制劑溶液；

b)總黃酮類成分指紋圖譜的構建：

將所述桑葛制劑溶液注入以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的液相色譜儀，紫外檢測器波長為250nm；柱溫為20-40℃；以乙腈為流動相A，以0.3％醋酸為流動相B進行梯度洗脫，得到所述總黃酮類成分指紋圖譜；以及

c)總生物堿類成分指紋圖譜的構建：

將預定量的所述桑葛制劑溶液置于容器中，將硼酸鹽緩沖液和芴甲氧酰氯乙腈溶液加入所述容器中，水浴下反應；再依次將甘氨酸溶液、醋酸水溶液加入到所述桑葛制劑溶液，過濾后取續濾液注入高效液相色譜儀，其中，

所述高效液相色譜儀中的色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，熒光檢測器激發波長為254nm，發射波長為309nm，柱溫為20-40℃，以乙腈為流動相C，0.1％醋酸為流動相D進行梯度洗脫，得到所述總生物堿類成分指紋圖譜。

2.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述步驟b)的梯度洗脫程序如下：

0～20分鐘流動相A體積比保持為10.5％，流動相B體積比保持為89.5％；

20～60分鐘流動相A體積比由10.5％線性上升到40％，流動相B體積比由89.5％下降到60％；

60～62分鐘流動相A體積比由40％線性下降到10.5％，流動相B體積比由60％上升到89.5％；

62～70分鐘流動相A體積比保持為10.5％、流動相B體積比保持為89.5％，得到所述總黃酮類成分指紋圖譜。

3.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述步驟c)的梯度洗脫程序如下：

0～50分鐘，所述流動相C體積比由30％上升到35％，所述流動相D體積比由70％下降到65％；

50～60分鐘，所述流動相C體積比保持為35％，所述流動相D體積比保持為65％；

60～61分鐘，所述流動相C體積比由35％上升到100％，所述流動相D體積比由65％下降到0％；

61～70分鐘，所述流動相C體積比保持為100％，所述流動相D體積比保持為0％；

70～71分鐘，所述流動相C體積比由100％下降到30％，所述流動相D體積比由0％上升到70％，得到所述總生物堿類成分指紋圖譜。

4.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述步驟b)進一步包括將葛根素加入水中制得葛根素參照物溶液的步驟，所述葛根素參照物溶液與所述桑葛制劑溶液同時注入所述液相色譜儀。

5.根據權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述步驟c)進一步包括將1-脫氧野尻霉素鹽酸鹽溶入水中制得1-脫氧野尻霉素鹽酸鹽參照物溶液的步驟，所述1-脫氧野尻霉素鹽酸鹽參照物溶液與所述桑葛制劑溶液同時注入所述高效液相色譜儀。

6.根據權利要求1-5中任一項所述的構建方法，其特征在于，所述總黃酮類成分的對照指紋圖譜具有17個共有指紋峰，相對保留時間分別為：

1號峰為0.487±0.009，2號峰為0.536±0.004，3號峰為S峰，為1.000±0.000，4號峰為1.099±0.030，5號峰為1.217±0.002，6號峰為1.308±0.001，7號峰為1.890±0.002，8號峰為2.268±0.008，9號峰為2.314±0.006，10號峰為2.445±0.010，11號峰為2.507±0.028，12號峰為2.549±0.010，13號峰為2.722±0.012，14號峰為2.771±0.012，15號峰為2.930±0.007，16號峰為3.423±0.019，17號峰為3.529±0.017。