[發明專利]豬乙型腦炎病毒與豬細小病毒二聯滅活疫苗及其制備方法

有效

• 申請號: 201110203864.X
• 申請日: 2011-07-20
• 公開（公告）號: CN102886043A
• 公開（公告）日: 2013-01-23
• 發明（設計）人: 張許科;孫進忠;白朝勇
• 申請（專利權）人: 普萊柯生物工程股份有限公司
• 主分類號: A61K39/295
• 分類號: A61K39/295;A61P31/14;A61P31/20;A61K39/12;A61K39/23
• 代理公司: 北京華夏正合知識產權代理事務所(普通合伙) 11017
• 代理人: 韓登營

1.一種豬乙型腦炎病毒與豬細小病毒二聯滅活疫苗的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)在潮汐式生物反應器中，接種動物細胞至生物反應器內的微載體上，進行細胞的吸附培養；

2)在細胞的吸附培養結束后進行細胞的擴增培養，將豬乙型腦炎病毒與豬細小病毒接種到擴增培養的細胞上，進行病毒的吸附培養；

3)在病毒的吸附培養結束后進行病毒的增殖培養；

4)在接種的動物細胞病變CPE達到75％以上時，收獲病毒液；

5)將收獲的病毒培養液于-20℃凍融兩次，濃縮后滅活，獲得滅活的豬乙型腦炎病毒與豬細小病毒混合液；

6)進行水相與油相的配置：將豬乙型腦炎病毒與豬細小病毒混合液作為水相，加入乳化劑，乳化后獲得豬乙型腦炎病毒與豬細小病毒二聯滅活疫苗。

2.根據權利要求1所述的二聯滅活疫苗的制備方法，其特征在于，所述微載體由選自聚酯、明膠或多糖的一種或幾種制成。

3.根據權利要求1所述的二聯滅活疫苗的制備方法，其特征在于，所述微載體以0.5×10⁶～5×10⁶cells/g的終密度接種細胞。

4.根據權利要求1所述的二聯滅活疫苗的制備方法，其特征在于，所述微載體的添加量為40～80g/L。

5.根據權利要求1所述的二聯滅活疫苗的制備方法，其特征在于，所述豬乙型腦炎病毒為SD-2011株，保藏號為V201119；所述豬細小病毒為HN-2011株，保藏號為V201118。

6.根據權利要求1所述的二聯滅活疫苗的制備方法，其特征在于，步驟2)中接種時的細胞濃度為0.5×10⁷～1.0×10⁸cells/g。

7.根據權利要求1所述的二聯滅活疫苗的制備方法，其特征在于，步驟2)中所述豬乙腦病毒和豬細小病毒接種的感染復數為0.0001～1.5。

8.根據權利要求1所述的二聯滅活疫苗的制備方法，其特征在于，步驟1)中所述的吸附培養和步驟2)中所述的擴增培養使用含3％～5％(V/V)牛血清的細胞培養液；步驟3)中所述的病毒吸附培養和步驟4)中所述的病毒增殖培養使用1％(V/V)牛血清的細胞培養液，其中所述的細胞培養液為選自DMEM、MEM、α-MEM、EMEM、1640、M199、F10和F12中的一種，所述的牛血清為胎牛血清、新生牛血清或小牛血清。

9.根據權利要求1中所述的二聯滅活疫苗的制備方法，其特征在于，在步驟1)至步驟2)的培養過程中控制葡萄糖含量范圍為1.0～4.5g/L，溫度37.0℃，pH調節7.0～7.5，溶氧調節40％～80％，二氧化碳濃度為5％～10％的條件下進行。

10.根據權利要求1中所述的二聯滅活疫苗的制備方法，其特征在于，在步驟3)至步驟4)的培養過程中控制溫度36.5℃，pH調節7.0～7.5，溶氧調節30％～80％，二氧化碳濃度為3％～5％的條件下進行。

11.根據權利要求1-10任一項制備方法獲得的豬乙型腦炎病毒與豬細小病毒二聯滅活疫苗。

12.根據權利要求11的二聯滅活疫苗，其特征在于，所述豬乙型腦炎病毒為SD-2011株，保藏號為V201119；所述豬細小病毒為HN-2011，保藏號為V201118。

13.一種豬乙型腦炎病毒為SD-2011株，保藏號為V201119。

14.一種豬細小病毒為HN-2011，保藏號為V201118。