[發明專利]肺炎支原體快速培養、鑒別與藥敏的試劑盒及其檢測方法

無效

• 申請號: 201110203204.1
• 申請日: 2011-07-20
• 公開（公告）號: CN102888441A
• 公開（公告）日: 2013-01-23
• 發明（設計）人: 農高惠
• 申請（專利權）人: 農高惠
• 主分類號: C12Q1/18
• 分類號: C12Q1/18;C12Q1/04;C12R1/35
• 代理公司: 廣州天河互易知識產權代理事務所(普通合伙) 44294
• 代理人: 鮑子玉

技術領域

本發明涉及一種肺炎支原體檢測技術領域，具體涉及一種肺炎支原體快速培養、鑒別與藥敏的試劑盒，以及采用該試劑盒檢測肺炎支原體的檢測方法。

背景技術

肺炎支原體(myeoplasmapneumoniae，Mp)是介于細菌和病毒之間、兼性厭氧、能獨立生活的最小微生物，經呼吸道傳播，是呼吸道感染的主要病原體，其引起的支原體肺炎占非細菌性肺炎的1/3以上。

臨床檢測肺炎支原體(MP)感染的方法有以下幾種：

1、檢測血清中的Mp抗體：本法快速簡便，陽性率高，但Mp抗體是人體受Mp感染刺激的產物，感染后數周才能檢出，可維持數月至數年。因此，Mp抗體陽性結果與Mp感染不同步；

2、簡單鑒別培養：本法培養基中含葡萄糖，僅靠分解葡萄糖產酸使指示劑變色原理對Mp進行鑒別，因許多微生物(包括非致病支原體)也能葡萄糖產酸，故檢測假陽性常見；

3、選擇鑒別培養：本法培養基中加有美蘭和葡萄糖，因只有Mp等極少數微生物能在含美蘭的培養液中生長而分解葡萄糖產酸，故結果較準確，故國外實驗室多推薦采用；

4、Mp基因檢測(PCR法)：本法直接檢測Mp的基因，為臨床提供Mp感染的直接依據，但對人員、環境、設備、試劑要求高，稍不慎則易出現假陽性及假陰性；

簡單培養+藥敏試驗法：如專利CN101748187A、CN101555517A，由培養液和藥敏微孔板組成。培養液屬簡單鑒別培養液，抑菌成分單一；藥敏微孔板參照檢測泌尿系統感染支原體(解脲支原體、人型支原體)使用的方法制備，不含選擇鑒別(如美蘭還原耐受)功能，難于無法避免細菌、真菌、其它支原體引起的假陽性。

發明內容

為了解決上述問題，本發明的目的在于提供一種檢測周期短、且能夠避免假陽性的肺炎支原體快速培養、鑒別與藥敏的試劑盒以及檢測方法。

為實現上述發明目的，本發明所采用技術方案如下：

一種肺炎支原體快速培養、鑒別與藥敏的試劑盒，其特征在于該試劑盒包括：

培養管，在所述培養管內盛裝有：為Mp生長提供基本營養的基礎液、提高Mp生長速度的促生長劑、指示MP生長進度的生長指示劑、以及抑制其他雜菌生長的雜菌抑制劑；

藥敏鑒別板，該藥敏鑒別板包括鑒別區和藥敏試驗區；所述鑒別區包括四個鑒別微孔，所述四個鑒別微孔分別盛裝有干燥的精氨酸(Arg)、氯化三苯基四氮唑藍(TTC)、美蘭(MB)、以及β-內酰胺類藥物(β-Lac)；所述藥敏試驗區包括14組藥敏檢測單元，每組藥敏檢測單元包括兩個藥敏微孔，在各組藥敏檢測單元內分別盛裝有紅霉素、乙酰螺旋霉素、交沙霉素、四環素、強力霉素、米諾環素、羅紅霉素、左氧氟沙星、氧氟沙星、阿奇霉素、克拉霉素、斯帕沙星、環丙沙星、以及壯觀霉素，其同一組藥敏檢測單元的兩個藥敏微孔中盛裝的藥物濃度不相同；以及

盛裝有無菌礦物油的容器單元。

所述肺炎支原體快速培養、鑒別與藥敏的試劑盒中，所述基礎液為支原體培養基基礎、Hayflick培養基、改良馬丁培養基中的任一種。

所述肺炎支原體快速培養、鑒別與藥敏的試劑盒中，所述促生長劑包括主成分和添加成分；所述主成分為濃度5％～20％的馬血清或小牛血清；所述添加成分為酵母浸出粉、丙酮酸鈉、半胱氨酸、異抗壞血酸、卵黃液中的一種或幾種。

所述肺炎支原體快速培養、鑒別與藥敏的試劑盒中，所述生長指示劑包括葡萄糖、酚紅、以及脫氫酶色原底物。

所述肺炎支原體快速培養、鑒別與藥敏的試劑盒中，所述雜菌抑制劑包括萬古霉素、啶酸、二性霉素B、多粘菌素B、以及甲氧芐氨嘧啶(TMP)。

一種使用所述試劑盒檢測肺炎支原體的檢測方法，包括以下步驟：

將樣本拭子放入培養管的培養液中充分洗脫擠干；

再將培養液以100微升每孔(ul/孔)的量加入至藥敏鑒別板的微孔中；

將礦物油以1滴每孔的量添加至各個微孔中；

將試劑盒放置在35℃～37℃的環境下培養24～72小時，根據微孔顏色變化判定結果。

結果判斷如下：

鑒別區：Arg-TTC-MB-β-Lac表現為黃-紅-黃綠-黃為Mp，否則為其它支原體；

藥敏區：同種藥物低濃度(L)孔、高濃度(H)孔均紅，判敏感；低濃度(L)孔變黃、高濃度(H)孔紅，判中敏；低濃度(L)孔、高濃度(H)孔均黃，判耐藥。

本發明的有益效果如下：

1、本發明通過培養液配方中雜菌抑制劑的設計，解決了細菌和真菌引起的假陽性問題；