[發明專利]一種特異性指示禽糞便污染的基因檢測方法無效
| 申請號： | 201110202716.6 | 申請日： | 2011-07-20 |
| 公開（公告）號： | CN102260744A | 公開（公告）日： | 2011-11-30 |
| 發明（設計）人： | 傅玲琳;王彥波 | 申請（專利權）人： | 浙江工商大學 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12N15/11;G01N21/64 |
| 代理公司： | 浙江杭州金通專利事務所有限公司 33100 | 代理人： | 徐關壽 |
| 地址： | 310018 浙江*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 特異性 指示 糞便 污染 基因 檢測 方法 | ||
1.一種特異性指示禽糞便污染的基因檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：
a)從水域中提取待測水樣DNA；
b)用熒光定量PCR擴增樣品DNA；其中，引物核苷酸序列為：
正向引物Av-BacF:?5’-?CTTCGATGGATAGGGGTTCT-3’
反向引物Av-BacR:?5’-CGCCCATTGACCAATA-3’
探針序列為：FAM-GAACTGAGACACGGTCC-TAMRA；
c)將上述擴增產物核苷酸序列與下述核苷酸序列進行比對：
Av-Bac：5’-CTTCG?ATGGA?TAGGG?GTTCT?GAGAG?GAAGG?TCCCC?CACAT?TGGAA?CTGAG?ACACG?GTCCA?AACTC?CTACG?GGAGG?CAGCA?GTGAG?GAATA?TTGGT?CAATG?GGCG-3’
若二者核苷酸序列相同，且該序列平均濃度為每毫升樣品中含2.5±0.3?log10拷貝，則該水域判斷為受禽糞便污染的水域。
2.如權利要求1所述的基因檢測方法，其特征在于，步驟b中，熒光定量PCR反應的引物濃度為300?nmol，探針濃度為200?nmol。
3.如權利要求1所述的基因檢測方法，其特征在于，步驟b中，熒光定量PCR反應程序為：95?°C，10?min；95?°C?15?sec,?58?°C?1?min，45個循環，在每個循環退火、延伸階段收集熒光信號。
4.一種用于權利要求1-3任一權利要求所述基因檢測方法的引物，其特征在于，該引物序列為：正向引物Av-BacF:?5’-?CTTCGATGGATAGGGGTTCT-3’；反向引物Av-BacR:?5’-CGCCCATTGACCAATA-3’。
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