[發(fā)明專利]油田生產(chǎn)水中硫酸鹽還原菌的分離純化方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110201980.8
• 申請(qǐng)日: 2011-07-20
• 公開（公告）號(hào): CN102260642A
• 公開（公告）日: 2011-11-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 胡欣
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津億利科能源科技發(fā)展股份有限公司
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12N1/02
• 代理公司: 天津市鼎和專利商標(biāo)代理有限公司 12101
• 代理人: 朱瑜

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于石油微生物技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種油田生產(chǎn)水中硫酸鹽還原菌的分離純化方法。

背景技術(shù)

硫酸鹽還原菌（SRB）是利用油田生產(chǎn)水中的硫酸鹽或者其它氧化態(tài)硫化物作為電子受體來異化有機(jī)物質(zhì)的微生物，它將SO₄^2-還原成H₂S，進(jìn)而改變油田水質(zhì)的pH和金屬的腐蝕狀態(tài)，是金屬腐蝕速度顯著增加的重要因素，對(duì)油田管道帶來腐蝕、堵塞等諸多有害作用。

分離和純化SRB獲得純種的SRB單菌株，可以為油田現(xiàn)場(chǎng)環(huán)境的菌群結(jié)構(gòu)分析以及腐蝕現(xiàn)狀和水質(zhì)情況的評(píng)價(jià)提供重要的理論依據(jù)。

現(xiàn)有的分離純化細(xì)菌的方法主要有平板劃線法和稀釋平板涂抹法，但是這兩種方法都只適用于好氧菌的分離和純化，對(duì)于SRB這種要求低氧含量的兼性厭氧菌均不適用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明為解決公知技術(shù)中存在的技術(shù)問題而提供一種油田生產(chǎn)水中硫酸鹽還原菌的分離純化方法。

本發(fā)明的目的是解決現(xiàn)有微生物分離純化技術(shù)的局限性、適用范圍小、操作復(fù)雜等問題，提供一種具有工藝簡(jiǎn)單，操作方便，材料易得，經(jīng)濟(jì)實(shí)用，高效快捷，分離和純化效果好等特點(diǎn)的油田生產(chǎn)水中硫酸鹽還原菌的分離純化方法。

本發(fā)明為解決公知技術(shù)中存在的技術(shù)問題所采取的技術(shù)方案是：

一種油田生產(chǎn)水中硫酸鹽還原菌的分離純化方法，其特點(diǎn)是：油田生產(chǎn)水加入硫酸鹽還原菌的液體培養(yǎng)基中，30-37℃恒溫厭氧富集培養(yǎng)至液體富集培養(yǎng)液變黑并發(fā)出硫化氫的臭雞蛋味；對(duì)硫酸鹽還原菌的富集培養(yǎng)液進(jìn)行梯度稀釋，將稀釋后的細(xì)菌富集液進(jìn)行固體夾層平板涂布，將固體硫酸鹽還原菌的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿蓋中，冷卻凝固后形成下層培養(yǎng)基，吸取稀釋后的富集菌液均勻涂布在下層培養(yǎng)基上，再傾入上層固體硫酸鹽還原菌培養(yǎng)基，將培養(yǎng)皿底反向蓋在上層培養(yǎng)基上，30-37℃恒溫培養(yǎng)；待夾層中出現(xiàn)使周圍固體培養(yǎng)基變黑的單菌落時(shí)，將單菌落挑入硫酸鹽還原菌液體富集培養(yǎng)基進(jìn)行富集培養(yǎng)，液體富集培養(yǎng)基中取培養(yǎng)液變得最黑者的菌株重復(fù)夾層平板培養(yǎng)到液體富集培養(yǎng)步驟三次，即得到硫酸鹽還原菌的純菌株。

本發(fā)明還可以采用如下技術(shù)方案：

所述的油田生產(chǎn)水中硫酸鹽還原菌的分離純化方法，其特點(diǎn)是：油田生產(chǎn)水現(xiàn)場(chǎng)采集后進(jìn)行密封處理并低溫保存。

所述的油田生產(chǎn)水中硫酸鹽還原菌的分離純化方法，其特點(diǎn)是：低溫保存溫度為2-8℃。

所述的油田生產(chǎn)水中硫酸鹽還原菌的分離純化方法，其特點(diǎn)是：恒溫厭氧富集培養(yǎng)2-5天至液體富集培養(yǎng)液變黑并發(fā)出硫化氫的臭雞蛋味。?

所述的油田生產(chǎn)水中硫酸鹽還原菌的分離純化方法，其特點(diǎn)是：硫酸鹽還原菌的富集培養(yǎng)液進(jìn)行梯度稀釋時(shí)，利用無菌水進(jìn)行10^-1~10^-10梯度稀釋。

所述的油田生產(chǎn)水中硫酸鹽還原菌的分離純化方法，其特點(diǎn)是：固體培養(yǎng)基為含有15-30%瓊脂的液體培養(yǎng)基。

本發(fā)明中，培養(yǎng)皿的疊放次序是培養(yǎng)皿蓋在下，培養(yǎng)皿底反向蓋在上面，在其間為兩層固體培養(yǎng)基的夾層平板。

本發(fā)明中，培養(yǎng)皿底反向蓋在上層固體培養(yǎng)基上時(shí)操作應(yīng)注意避免帶入氣泡，以避免影響單菌落的形態(tài)觀察和挑取。

本發(fā)明具有的優(yōu)點(diǎn)和積極效果是：

1、本發(fā)明采用固體夾層平板涂布法分離和純化油田生產(chǎn)水中的硫酸鹽還原菌，該方法簡(jiǎn)單，容易操作，需要的材料和用品一般微生物實(shí)驗(yàn)室都具備，且可以獲得硫酸鹽還原菌純菌株。

2、本發(fā)明為油田企業(yè)和微生物實(shí)驗(yàn)室提供了一種方便開展的分離和純化油田生產(chǎn)水中的硫酸鹽還原菌的方法，有利于油田企業(yè)和相關(guān)的微生物實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行SRB菌株的分離和純化，為研究分析油田現(xiàn)場(chǎng)環(huán)境的菌群結(jié)構(gòu)以及腐蝕現(xiàn)狀和水質(zhì)情況的評(píng)價(jià)提供重要的理論依據(jù)。

本發(fā)明具有工藝簡(jiǎn)單，操作方便，材料易得，經(jīng)濟(jì)實(shí)用，高效快捷，分離和純化效果好等優(yōu)點(diǎn)，能有效獲得油田生產(chǎn)水中硫酸鹽還原菌的純菌株。

附圖說明

圖1是本發(fā)明的第三代SRB固體夾層平板；

圖2是SRB純菌株顯微照片。

具體實(shí)施方式

為能進(jìn)一步了解本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容、特點(diǎn)及功效，茲例舉以下實(shí)施例，并配合附圖詳細(xì)說明如下：

實(shí)施例1