[發明專利]用生物玻璃促使蛋白質結晶的方法

有效

• 申請號: 201110201924.4
• 申請日: 2011-07-19
• 公開（公告）號: CN102887939A
• 公開（公告）日: 2013-01-23
• 發明（設計）人: 李云;胡春良;彭萍
• 申請（專利權）人: 江蘇同庚電子科技有限公司
• 主分類號: C07K1/14
• 分類號: C07K1/14;C03C12/00
• 代理公司: 常州市江海陽光知識產權代理有限公司 32214
• 代理人: 翁堅剛

1.一種用生物玻璃促使蛋白質結晶的方法，其特征在于：先將生物玻璃顆粒與增加生物玻璃表面活性的液體混合均勻，再進行超聲振蕩而獲得生物玻璃懸濁液，然后用滴管將生物玻璃懸濁液轉移至蛋白質結晶環境，從而生物玻璃懸濁液促進蛋白質結晶；

所述生物玻璃顆粒的粒度100nm～200nm，平均孔徑90nm～200nm，懸濁液中生物玻璃顆粒的濃度為1～100個/μL。

2.根據權利要求1所述的用生物玻璃促使蛋白質結晶的方法，其特征在于：生物玻璃懸濁液中生物玻璃顆粒的濃度為2～50個/μL。

3.根據權利要求1所述的用生物玻璃促使蛋白質結晶的方法，其特征在于：所述增加生物玻璃表面活性的液體為混合溶液，其中溶劑為去離子水，溶質包括濃度為15～25mg/mL的氯仿、1～3mg/mL的致孔劑聚乙二醇及3～8mg/mL活性劑硫酸化油。

4.根據權利要求1所述的用生物玻璃促使蛋白質結晶的方法，其特征在于：所述增加生物玻璃表面活性的液體為去離子水。

5.根據權利要求1所述的用生物玻璃促使蛋白質結晶的方法，其特征在于：所述蛋白質結晶環境為在微流體蛋白質結晶板中的結晶環境；

所述微流體蛋白質結晶板為注塑一體件，包括支撐結構部（1）以及在支撐結構部（1）上以陣列形式分布的結晶單元（2），每一個結晶單元（2）由兩端的儲液孔部（21）和連通兩端儲液孔部（21）的上下連接槽（23、22）組成，所述儲液孔部（21）的內腔截面積從上向下逐漸減小，連接槽部的上連接槽（23）上大下小；

蛋白質結晶時，將蛋白質過飽和溶液滴入結晶板的結晶單元（2）的其中一個儲液孔部（21）的儲液孔中，然后向結晶單元（2）的另一個儲液孔部（21）的儲液孔中滴入沉淀劑溶液和生物玻璃懸濁液，從而生物玻璃懸濁液進入結晶環境，也即2個儲液孔部（21）中的物質通過下連接槽（22）使得蛋白質過飽和溶液與生物玻璃懸濁液相互擴散，且下連接槽（22）的槽口部位以及儲液孔的下端口處設有用于密封的阻擋物；最后在兩邊溶液的界面處生物玻璃懸濁液促進蛋白質結晶。

6.根據權利要求1所述的用生物玻璃使蛋白質結晶的方法，其特征在于：生物玻璃懸浮液中的生物玻璃由溶膠凝膠法制得。

7.根據權利要求6所述的用生物玻璃使蛋白質結晶的方法，其特征在于：由溶膠凝膠法制備生物玻璃的步驟如下：先按照換算成氧化物摩爾比為?P₂O₅:CaO:MgO:SiO₂=1:（3～3.5）:（1～1.2）:（4.5～5.5）的比例，分別稱取對應量的P₂O₅?、Ca(NO₃)₂、Mg(NO3)₂、正硅酸乙酯，然后使各化合物分別與無水乙醇混合并加熱回流而溶解在乙醇中，分別制得均勻的P₂O₅的乙醇溶液、Ca(NO₃)₂的乙醇溶液、Mg(NO3)₂的乙醇溶液及正硅酸乙酯的乙醇溶液，乙醇與各物質的摩爾比分別為（4～10）:1；

向正硅酸乙酯的乙醇溶液中加入去離子水，使正硅酸乙酯預水解40～50分鐘；

將P₂O₅的乙醇溶液、Ca(NO₃)₂的乙醇溶液、Mg(NO3)₂的乙醇溶液依次滴加至上述正硅酸乙酯的乙醇溶液中，滴加時，前一種乙醇溶液滴加完畢1～1.5小時候再滴加后一種乙醇溶液，滴加完畢后加熱并劇烈攪拌而得到待溶膠化的混合液；

向上述混合液中加入去離子水，用硝酸調節溶液pH=2～2.5，而使得溶液溶膠化，制得的溶膠經過陳化、凝膠化制得濕凝膠；將濕凝膠與尿素混合均勻后放在500℃～550℃的爐中點火，燃燒結束后，淬火得到軟團聚粉末，在瑪瑙研缽中充分研磨，而得到超細生物玻璃顆粒，顆粒粒度小于200nm。