[發明專利]前列腺癌靶向基因的寡核苷酸適配體、遞釋載體、遞釋系統及其制備方法

無效

• 申請號: 201110201214.1
• 申請日: 2011-07-18
• 公開（公告）號: CN102268436A
• 公開（公告）日: 2011-12-07
• 發明（設計）人: 高申;武鑫;朱全剛;高靜;丁雪鷹;丁寶月;范偉;王翔;張瑋;韓雁;王曉宇;葉麗華;張敏
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第二軍醫大學
• 主分類號: C12N15/115
• 分類號: C12N15/115;C12N15/87;C08G81/00;A61K47/34;A61K48/00;A61P35/00
• 代理公司: 上海大邦律師事務所 31252
• 代理人: 周東萍

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種前列腺癌靶向基因前列腺癌靶向基因的寡核苷酸適配體、遞釋載體、遞釋系統及其制備方法。

背景技術

前列腺癌(prostatic?cancer，PCa)是男性生殖系統最常見的惡性腫瘤，其發病率隨年齡的增長而提高，已成為嚴重威脅人類健康的惡性疾病。在2010年美國癌癥學會公布的統計報告中，前列腺癌在男性的發病率中排名第一，死亡率排名第二，僅次于肺癌。對于PCa的治療，早期完整手術切除前列腺是首選的治療方案，但是手術治療會伴有嚴重的并發癥及醫源性損傷，而且對已發生轉移的PCa無效。目前臨床上治療中晚期PCa主要采用放療、化療(包括內分泌治療)等手段，這些治療方法存在用藥順應性差、組織選擇性差、毒性反應大及耐藥性等問題?；蛑委熛鄬τ谏鲜龇椒▉碚f具有許多無可比擬的優點，如靶向性好、毒副作用小及可特異性地殺傷腫瘤細胞等，但是外源基因自己不能主動進入細胞，因此基因治療應用于臨床還需要一種安全、高效的傳遞載體進行遞送。

目前報道較多的基因載體主要包括病毒載體和非病毒載體，病毒載體雖然具有很高的轉染率，但病毒載體的制備復雜且昂貴，需要重整病毒，更重要的是人們對于其可能引起免疫反應和基因突變引起致癌性轉化的安全隱患。而非病毒載體設計靈活，制備方便，價格低廉，無毒，無免疫反應，可以實現細胞特異性和長期基因表達的優點。常見的非病毒載體主要有聚乙烯亞胺(PEI)，聚精氨酸(PLR)，聚酰胺-胺(PAMAM)樹枝狀高分子等聚陽離子高分子材料，其中聚乙烯亞胺，聚精氨酸毒性較大，但通過特定的親水性聚合物修飾，可以降低其毒性。而PAMAM的粒徑大小、電泳性質和其他一些擬生態性質與球狀蛋白質非常相似，被稱為“人工蛋白”。

但是上述陽離子聚合物載體還存在一個嚴重缺陷-靶向性差。目前用于解決前列腺癌靶向性差的方法，主要是通過在載體上連接可以特異識別前列腺癌組織的靶向頭基，來完成對癌細胞的主動靶向作用。然而，目前主要使用的靶向頭基是單克隆抗體，單克隆抗體存在合成困難、造價高昂、穩定性差等缺陷，成為制約其作為進一步向臨床大規模生產發展的瓶頸。因此，有必要研發一種新型的前列腺癌靶向頭基來替代單克隆抗體，以及開發一種新型的適用于前列腺癌的靶向治療的前列腺癌靶向基因遞釋載體和相應的前列腺癌靶向基因遞釋系統。

發明內容

本發明需要解決的技術問題之一是提供一種前列腺癌靶向基因的寡核苷酸適配體，這種寡核苷酸適配體制備方便、穩定性高。

本發明需要解決的另一技術問題是提供一種前列腺癌靶向基因遞釋載體，該基因遞釋系統將上述寡核苷酸適配體作為靶向頭基，除了制備方便、穩定性高，而且能顯著提高基因遞釋系統的前列腺癌靶向性和基因在前列腺癌組織的表達。

本發明需要解決的另一技術問題是提供一種前列腺癌靶向基因遞釋系統，其能顯著提高治療基因在前列腺癌組織的轉染效率和表達水平

此外，本發明需要解決的另一技術問題是提供一種前列腺癌靶向基因遞釋載體和系統的制備方法。

為了解決上述技術問題，本發明通過如下技術方案實現：

在本發明的一個方面，提供了一種前列腺癌靶向基因的寡核苷酸適配體，該寡核苷酸適配體的序列組成為：5′-GGGAGGACGAUGCGGAUCAGCCAUGUUUACGUCACUCCU-(CH₂)₆-S-S-(CH₂)₆-OH-3′，且具有2′-氟修飾。

本發明通過對第一代適體A10進行修飾，將原有適體A10的79個核苷酸長度裁剪到具有39個核苷酸長度的新型第二代適體A10-3.2，降低了合成難度，通過與前列腺癌表面特異性膜抗原結合作用發現，結合效率有所提高，并且對A10-3.2的每個核苷酸進行了2’-氟修飾，增加了穩定性。因此，證明A10-3.2寡核苷酸適配體是一種有效的前列腺癌靶向頭基。

在本發明的另一個方面，提供了一種前列腺癌靶向基因遞釋載體，其由聚陽離子高分子材料、親水性聚合物和A10-3.2寡核苷酸適配體為基礎，三者以共價方式鏈接構成，其中，親水性聚合物與聚陽離子高分子的摩爾比是1～25∶1，A10-3.2寡核苷酸適配體與聚陽離子高分子材料的摩爾比為1～5∶1；所述A10-3.2寡核苷酸適配體的序列組成為：5′-GGGAGGACGAUGCGGAUCAGCCAUGUUUACGUCACUCCU-(CH2)6-S-S-(CH2)6-OH-3′，且具有2′-氟修飾。