[發(fā)明專利]一種制備生長抑素的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110200804.2
• 申請日: 2011-07-19
• 公開（公告）號: CN102268073A
• 公開（公告）日: 2011-12-07
• 發(fā)明（設計）人: 胡小光;黃文華;楊麗琴
• 申請（專利權）人: 南昌佰泰生物科技有限公司
• 主分類號: C07K7/08
• 分類號: C07K7/08;C07K1/20
• 代理公司: 南昌洪達專利事務所 36111
• 代理人: 劉凌峰

技術領域

?本發(fā)明屬于多肽領域，具體涉及一種制備生長抑素的方法。

背景技術

生長抑素，即生長激素釋放抑制因子，是人體內存在的一種內源性調節(jié)激素，對多種生理功能具有廣泛的抑制作用。生長抑素英文名：Somatostatin，分子式為：C₇₆H₁₀₄N₁₈O₁₉S₂,分子量1637.89。氨基酸結構簡寫為：???????????????????????????????????????????????

其分子結構式如下：

生長抑素是由下丘腦的正中隆起和胰島的δ細胞合成的，1973年由德國的Guillemin博士從綿羊的下丘腦分離得到并闡明其結構。Guillemin博士因此獲得1977年諾貝爾醫(yī)學和生理學獎。生長抑素化學結構為分子內帶有一對二硫鍵的十四肽，在人體中主要存在于中樞神經系統(tǒng)和周圍器官（如：胃，腸，胰，皮膚等），最大濃度見以下丘腦，但以消化道含量最大。

生長抑素生物功能可抑制腺體釋放生長激素、抑制促甲狀腺和腎上腺皮質激素、抑制胰腺的內分泌與外分泌、抑制胃粘膜釋放胃泌素、抑制腸粘膜釋放腸促胰激素和腎臟釋放腎素，降低門靜脈壓力、松馳膽道口擴約肌、刺激單核巨噬細胞系統(tǒng)而減輕內毒素血癥，抑制血小板活化因子的釋放，直接或間接調節(jié)細胞因子鏈產生細胞保護作用，并可增強抗癌藥物的抗增殖作用。臨床常應用于嚴重急性食管靜脈曲張破裂出血，嚴重急性胃、十二指腸潰瘍出血，急性糜爛性胃炎或出血性胃炎，胰、膽和腸屢的輔助治療，糖尿病酮癥酸中毒的輔助治療。其他一些作用和用途正隨著其基礎研究和臨床的深入而不斷被發(fā)現(xiàn)。因此生長抑素的應用前景廣闊，市場需求量正逐年增加。

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發(fā)明內容

本發(fā)明的目的在于提供一種制備生長抑素的方法，該方法首先對還原型生長抑素粗肽采用高效液相色譜法進行純化得到還原型生長抑素精肽，然后對還原型生長抑素精肽進行液相氧化得到氧化型生長抑素，然后再采用高效液相色譜法純化得到高純度生長抑素。

本發(fā)明的目的是這樣來實現(xiàn)的，其方法步驟為：

1）將固相合成所得還原型生長抑素粗肽用注射用水溶解，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，以三氟醋酸水溶液為A相、色譜純乙腈為B相，進行梯度洗脫純化，收集還原型精肽溶液。

2）將第一步所得還原型精肽溶液用純化水稀釋至約1g肽/1L純化水，用稀氨水調節(jié)PH至6-8之間，加入適量的H₂O₂氧化，得到氧化型粗肽溶液。

3）將氧化型粗肽溶液濃縮至一定體積，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，以磷酸三乙胺溶液為A相、色譜純乙腈為B相，進行梯度洗脫純化，收集氧化型精肽溶液。

4）將氧化型精肽溶液轉換成醋酸鹽。

純化規(guī)模包括以下規(guī)格的色譜柱：2CM×25CM(直徑×長度)、5CM×25CM、15CM×25CM

本發(fā)明的優(yōu)點在于本方法制得的產品純度高、收率高、操作簡便，非常適合工業(yè)化生產。

具體實施方式

下面以實例對本發(fā)明做進一步詳細說明：

實施例一：

1）將固相合成所得還原型生長抑素粗肽用注射用水溶解，以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，色譜柱規(guī)格為2CM×25CM(直徑×長度)；以0.05%-0.2%三氟醋酸水溶液為A相、色譜純乙腈為B相，進行梯度洗脫純化。流速：15-20ml/min。檢測波長：220nm。梯度：B%:15%-35%?40-60min。上樣量為120-150mg。收集還原型精肽溶液。

2）將第一步所得還原型精肽用純化水稀釋至約1g肽/1L純化水，用稀氨水調節(jié)PH至6-8之間，加入0.01%-1.5%（v/v）的H₂O₂氧化1-3小時，得到氧化型粗肽溶液備用。

3）將氧化型粗肽溶液在35℃以下減壓旋蒸濃縮至10-15ml。以十八烷基硅烷鍵合硅膠為固定相，色譜柱規(guī)格為2CM×25CM(直徑×長度)；以PH2.5-3.5磷酸三乙胺溶液為A相、色譜純乙腈為B相，進行梯度洗脫純化。流速：15-20ml/min。檢測波長：220nm。梯度：B%:10%-30%??60-80min。上樣量為90-130mg。收集氧化型精肽溶液。