[發明專利]一種實時熒光RT-PCR檢測脊髓灰質炎病毒的試劑盒

無效

• 申請號: 201110200692.0
• 申請日: 2011-07-18
• 公開（公告）號: CN102344971A
• 公開（公告）日: 2012-02-08
• 發明（設計）人: 李明;陳瑤;杜紅延;高秀潔;陳華云
• 申請（專利權）人: 南方醫科大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68;C12R1/93
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 陳衛

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技術領域

本發明涉及脊髓灰質炎病毒檢測技術，具體地說，涉及一種實時熒光RT-PCR檢測脊髓灰質炎病毒的試劑盒。

背景技術

脊髓灰質炎(poliomyelitis)是一種古老的疾病，是由脊髓灰質炎病毒引起的一種急性傳染性疾病，其臨床表現多種多樣，主要有發熱、咽痛和肢體疼痛等，部分病人可發生弛緩性麻痹。脊髓灰質炎病人，由于脊髓前角運動神經元受損，與之有關的肌肉失去了神經的調節作用而發生萎縮，同時皮下脂肪，肌腱及骨骼也萎縮，使整個機體變細。流行時以隱匿感染和無癱瘓病例為多。由于兒童發病比例較成人為高，在普種疫苗前以嬰幼兒患病為主，故又稱小兒麻痹癥（Infantile?paralysis）。

人是脊髓灰質炎病毒唯一的自然宿主，本病通過直接接觸傳染，是一種傳染性很強的接觸性傳染病，隱形感染者以及輕癥癱瘓型病人是本病的主要傳染源，在大規模流行時，隱性感染與臨床病例的比例超過100:1。脊髓灰質炎病毒以糞-口感染為主要傳播方式，發病前3~5天至發病后1周患者鼻咽部分泌物及糞便均可排出病毒，少數病倒糞便帶毒時間可長達3~4月；密切生活接觸，不良衛生習慣都可導致病毒的大面積擴散。

脊髓灰質炎的感染以隱性感染（占99％以上）為主，以發熱，咽痛，肢體疼痛等非特異性癥狀為主要臨床表現，嚴重可以出現癱瘓以及機體萎縮等前角神經元受損的癥狀。癱瘓病例中，90%以上發生于5歲以前。經濟發達的國家和地區環境衛生和個人衛生習慣的進步導致感染的年齡往往推遲，年長兒和青年人仍然是易感者，目前夏季流行在年長小兒中呈現一定的上升趨勢。

本病廣泛分布于全世界，溫帶地區流行高峰在5~10月，熱帶地區終年可見。1988年世界衛生組織提出2000年全球消滅脊髓炎，1989年又提出消滅本病的行動計劃，由于減毒活疫苗的應用，發病率已明顯下降。雖然我國已經響應世界衛生站組織號召進行了強制接種免疫，但是我國仍為流行地區。且近些年來，脊髓灰質炎減毒疫苗突變導致的脊髓灰質炎感染事件時見報道，而水產食品以及蔬菜引發的脊髓灰質炎病毒感染已經引起食品安全部門的關注。

脊髓灰質炎病毒的核酸為單股正鏈RNA，已知基因組的長度約為7.5kD。按其抗原性不同，將脊髓灰質炎病毒分為1、2、3等3個血清型。它們的理化性質基本相同，RNA的堿基組成也很相似。以上3個血清型的病毒RNA之間在核苷酸水平上有36％～52％的同源性。三種血清型的病毒都可以致病，其中導致癱瘓病例的主要是1型。脊髓灰質炎初起時與傷風感冒相類似，與其他病毒(柯薩奇病毒、埃可病毒、EB?病毒、流行性腮腺炎病毒、淋巴細胞脈絡叢腦膜炎病毒、流行性乙型腦炎病毒)感染所致的腦膜炎、化膿性腦膜炎、結核性腦膜炎、真菌性腦膜炎以及腦膜炎型鉤端螺旋體病等相鑒別。以及感染性多發性神經根炎或稱格林-貝爾綜合征（Guillain-Barre＇s?syndrome）臨床不易鑒別。目前對于脊髓灰質炎的臨床實驗室檢測主要分為三種，包括病毒分離培養，血清學檢測以及核酸檢測，其中以血清學和核酸檢測為主要手段，血清學檢測的診斷指標為?發病后1個月內從患者腦脊液或血中查到抗脊髓灰質炎病毒IgM抗體者；或恢復期患者血清中特異性IgG抗體滴度比急性期有4倍升高者；或腦脊液中特異性IgG抗體明顯升高，血液與腦脊液IgG抗體滴度比例失常或倒置(在血腦屏障無損傷時，血：腦脊液為200—400：1)者均有診斷價值。相對來說抗體的產生雖然具有診斷價值，但是對感染的早期判斷一般采取更敏感快速的PCR方法進行診斷。