[發明專利]一種組織工程用豬脫細胞真皮基質的調孔方法

有效

• 申請號: 201110199312.6
• 申請日: 2011-07-15
• 公開（公告）號: CN102258807A
• 公開（公告）日: 2011-11-30
• 發明（設計）人: 劉宏;趙洪石;王冠聰;任娜;陳麗梅;李建華;梁小萌;劉鐸;江懷東;陶緒堂;王繼揚
• 申請（專利權）人: 山東大學
• 主分類號: A61L27/36
• 分類號: A61L27/36;A61L27/56
• 代理公司: 濟南金迪知識產權代理有限公司 37219
• 代理人: 許德山

技術領域

本發明涉及一種組織工程用豬脫細胞真皮基質(PADM)的調孔方法，尤其涉及一種用生物大分子調控組織工程用豬脫細胞真皮基質(PADM)孔徑的方法，屬生物材料領域。?

背景技術

皮膚及骨修復材料的研制開發一直是組織工程領域大批科學工作者努力的方向。自體移植一直在臨床上占主導地位。但自體骨來源有限，而異體移植又有免疫排斥和感染疾病的危險。人們已經開發各種材料用于皮膚及骨組織工程領域。但是這些材料各有不足，不能完全達到臨床上的要求。由于皮膚和骨中的有機成分都主要是由I型膠原構成，因此膠原基支架材料便成了研究熱點。但傳統的膠原來源為從鼠尾及牛、馬的肌腱中提取而來，提取過程不僅破壞了膠原的天然結構，降低了其生物相容性及機械性能，且提取成本高。?

組織工程支架材料原理提示一個具有和原組織相似的組成和結構的材料將會有更優異的生物學性能。?

豬脫細胞真皮基質(PADM)主要由I型膠原構成，組成與天然骨及皮膚中有機組成十分相似。它的提取和純化方法較為成熟，美國已有部分產品被FDA認證并應用于臨床(Permacol，Covedien)。而且它在骨組織工程上的研究也開始引起研究學者們的注意。作為組織工程支架材料，其孔徑尺寸非常重要，它關系到細胞的遷移、組織的長入和代謝產物及營養物質的運輸。傳統的控制PADM孔形貌及尺寸的方法主要有化學交聯劑交聯法、機械打孔法和激光造孔法。這些方法都在不同程度上對PADM有損傷或改變了其天然的結構，因此，開發新的、更實用的組織工程用豬脫細胞真皮基質(PADM)的調孔方法勢在必行。?

發明內容

針對現有的PADM孔徑調控方法中存在的不足，本發明目的是提出一種用生物大分子調控組織工程用豬脫細胞真皮基質(PADM)孔尺寸的方法。?

本發明所述的組織工程用豬脫細胞真皮基質(PADM)的調孔方法，是將陰離子生物大分子或陽離子生物大分子加入充分潤濕的豬脫細胞真皮基質水溶液(pH＝7)中，通過調節膠原的動電電位即zeta電位實現；其特征在于：所述陰離子生物大分子為聚天門冬氨酸鈉，所述陽離子生物大分子為水溶性殼聚糖；所述生物大分子與豬脫細胞真皮基質的重量比例是1∶5～1∶25。?

其中：所述聚天門冬氨酸鈉選分子量2000-3500道爾頓，密度1.1g/cm³(20℃)，pH(1％)為4-7的聚天門冬氨酸鈉；所述水溶性殼聚糖選脫乙酰度為85-87％，粘度(1％)為30-300mpa.s，pH(1％)為4-7的水溶性殼聚糖。?

上述組織工程用豬脫細胞真皮基質的調孔方法，進一步具體的實施步驟是：?

(1)稱取一定量豬脫細胞真皮基質，然后按豬脫細胞真皮基質與超純水為1∶100～1∶200的重量比例混合，然后在恒溫搖床中以80-150轉/分的速度，將豬脫細胞真皮基質支架充分潤濕12-24小時；?

(2)按生物大分子與豬脫細胞真皮基質的重量比為1∶5～1∶25的比例將陰離子生物大分子或陽離子生物大分子溶于上述含有支架的水中，繼續在恒溫搖床中以80-150轉/分的速度反應12-24小時；?

(3)取出支架，以去離子水并用速度為80-130轉/分鐘的搖床對其洗滌3-5次，每次30-120分鐘；?

(4)對洗滌后的支架在零下70℃條件下進行冷凍，然后在零下50-60℃下冷凍干燥12-16小時，得孔徑為50-300微米、孔壁厚為5-10微米的片狀或松散膠原束結構的豬脫細胞真皮基質支架。?

上述組織工程用豬脫細胞真皮基質的調孔方法中：豬脫細胞真皮基質(PADM)是采用中國專利031390633所述的方法制備的。?

上述組織工程用豬脫細胞真皮基質的調孔方法中：所述豬脫細胞真皮基質與超純水的重量比優選1∶120～1∶170。?

上述組織工程用豬脫細胞真皮基質的調孔方法中：所述生物大分子與豬脫細胞真皮基質的重量比優選1∶7～1∶15。?

上述組織工程用豬脫細胞真皮基質的調孔方法中：所述陰離子生物大分子為聚天門冬氨酸鈉，所述陽離子生物大分子為水溶性殼聚糖。?

上述組織工程用豬脫細胞真皮基質的調孔方法中：所述洗滌時的搖床速度優選90-120轉/分鐘，洗滌時間每次為45-90分鐘，此步驟即要保證去除殘留生物大分子，又要防止支架受到機械破壞。?