[發(fā)明專利]臍帶華通膠間充質干細胞在制備細胞移植材料中的應用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110198337.4
• 申請日: 2011-07-15
• 公開（公告）號: CN102258809A
• 公開（公告）日: 2011-11-30
• 發(fā)明（設計）人: 阮狄克;張燕;李海峰;吳劍宏;張超;王德利;何勍;王超峰;辛洪奎
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍海軍總醫(yī)院
• 主分類號: A61L27/38
• 分類號: A61L27/38;C12N5/0775
• 代理公司: 北京知本村知識產權代理事務所 11039
• 代理人: 周自清

1.臍帶華通膠間充質干細胞在制備人椎間盤細胞移植材料和制備椎間盤組織工程種子細胞材料中的應用。

2.權利要求1所述的臍帶華通膠間充質干細胞的應用包括以下方法步驟：

以分娩后新生兒臍帶為材料制備華通膠間充質干細胞；

以實施椎間盤摘除術被摘除遺棄的椎間盤標本為材料分離培養(yǎng)正常髓核細胞；

以與髓核細胞共培養(yǎng)方法誘導分化臍帶華通膠間充質干細胞。

3.根據權利要求2所述的臍帶華通膠間充質干細胞的應用，其特征在于，所述臍帶華通膠間充質干細胞的制備包括以下步驟：取臍帶血管之間以及血管與外膜之間的華通膠組織，經膠原酶消化18小時、胰蛋白酶消化30分鐘，用含20％胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基進行傳代培養(yǎng)。

4.根據權利要求2所述的臍帶華通膠間充質干細胞的應用，其特征在于，所述正常髓核細胞的分離培養(yǎng)包括以下步驟：取新鮮椎間盤標本分離髓核組織，經Ⅱ型膠原酶溶液消化5小時，再以含10％胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基培養(yǎng)。

5.根據權利要求2所述的臍帶華通膠間充質干細胞的應用，其特征在于，所述以與髓核細胞共培養(yǎng)方法誘導分化臍帶華通膠間充質干細胞的方法為非接觸式方法，具體工藝步驟為：使用聚對苯二甲酸乙酯制作的、孔徑大小為0.4μm的Transwell六孔板進行共培養(yǎng)，其插入層接種髓核細胞6×10⁴，下層接種華通膠間充質干細胞2×10⁴，培養(yǎng)7天后，收集華通膠間充質干細胞。

6.根據權利要求2所述的臍帶華通膠間充質干細胞的應用，其特征在于，所述以與髓核細胞共培養(yǎng)方法誘導分化臍帶華通膠間充質干細胞的方法為接觸式方法，具體工藝步驟為：用乙酰乙酸琥珀酰亞胺酯標記華通膠間充質干細胞，與髓核細胞混勻，接種于普通六孔板，細胞接種密度為6.0×10³/cm²；培養(yǎng)7天后進行細胞分選，收集華通膠間充質干細胞。

7.根據權利要求6所述的臍帶華通膠間充質干細胞的應用，其特征在于，所述以接觸式誘導分化臍帶華通膠間充質干細胞的方法中，接種的髓核細胞數量為華通膠間充質干細胞的3倍。