[發(fā)明專利]臍帶華通膠間充質(zhì)干細(xì)胞在制備細(xì)胞移植材料中的應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110198337.4
• 申請日: 2011-07-15
• 公開（公告）號: CN102258809A
• 公開（公告）日: 2011-11-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 阮狄克;張燕;李海峰;吳劍宏;張超;王德利;何勍;王超峰;辛洪奎
• 申請（專利權(quán)）人: 中國人民解放軍海軍總醫(yī)院
• 主分類號: A61L27/38
• 分類號: A61L27/38;C12N5/0775
• 代理公司: 北京知本村知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 11039
• 代理人: 周自清

1.臍帶華通膠間充質(zhì)干細(xì)胞在制備人椎間盤細(xì)胞移植材料和制備椎間盤組織工程種子細(xì)胞材料中的應(yīng)用。

2.權(quán)利要求1所述的臍帶華通膠間充質(zhì)干細(xì)胞的應(yīng)用包括以下方法步驟：

以分娩后新生兒臍帶為材料制備華通膠間充質(zhì)干細(xì)胞；

以實(shí)施椎間盤摘除術(shù)被摘除遺棄的椎間盤標(biāo)本為材料分離培養(yǎng)正常髓核細(xì)胞；

以與髓核細(xì)胞共培養(yǎng)方法誘導(dǎo)分化臍帶華通膠間充質(zhì)干細(xì)胞。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的臍帶華通膠間充質(zhì)干細(xì)胞的應(yīng)用，其特征在于，所述臍帶華通膠間充質(zhì)干細(xì)胞的制備包括以下步驟：取臍帶血管之間以及血管與外膜之間的華通膠組織，經(jīng)膠原酶消化18小時、胰蛋白酶消化30分鐘，用含20％胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的臍帶華通膠間充質(zhì)干細(xì)胞的應(yīng)用，其特征在于，所述正常髓核細(xì)胞的分離培養(yǎng)包括以下步驟：取新鮮椎間盤標(biāo)本分離髓核組織，經(jīng)Ⅱ型膠原酶溶液消化5小時，再以含10％胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基培養(yǎng)。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的臍帶華通膠間充質(zhì)干細(xì)胞的應(yīng)用，其特征在于，所述以與髓核細(xì)胞共培養(yǎng)方法誘導(dǎo)分化臍帶華通膠間充質(zhì)干細(xì)胞的方法為非接觸式方法，具體工藝步驟為：使用聚對苯二甲酸乙酯制作的、孔徑大小為0.4μm的Transwell六孔板進(jìn)行共培養(yǎng)，其插入層接種髓核細(xì)胞6×10⁴，下層接種華通膠間充質(zhì)干細(xì)胞2×10⁴，培養(yǎng)7天后，收集華通膠間充質(zhì)干細(xì)胞。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的臍帶華通膠間充質(zhì)干細(xì)胞的應(yīng)用，其特征在于，所述以與髓核細(xì)胞共培養(yǎng)方法誘導(dǎo)分化臍帶華通膠間充質(zhì)干細(xì)胞的方法為接觸式方法，具體工藝步驟為：用乙酰乙酸琥珀酰亞胺酯標(biāo)記華通膠間充質(zhì)干細(xì)胞，與髓核細(xì)胞混勻，接種于普通六孔板，細(xì)胞接種密度為6.0×10³/cm²；培養(yǎng)7天后進(jìn)行細(xì)胞分選，收集華通膠間充質(zhì)干細(xì)胞。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的臍帶華通膠間充質(zhì)干細(xì)胞的應(yīng)用，其特征在于，所述以接觸式誘導(dǎo)分化臍帶華通膠間充質(zhì)干細(xì)胞的方法中，接種的髓核細(xì)胞數(shù)量為華通膠間充質(zhì)干細(xì)胞的3倍。