[發明專利]水稻種子谷蛋白GluB-4基因終止子及其應用

有效

• 申請號: 201110197625.8
• 申請日: 2011-07-15
• 公開（公告）號: CN102260674A
• 公開（公告）日: 2011-11-30
• 發明（設計）人: 曲樂慶;李文靜
• 申請（專利權）人: 中國科學院植物研究所
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/63;C12N5/10;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N7/01;A01H5/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;任鳳華

技術領域

本發明涉及一種水稻種子谷蛋白GluB-4基因終止子及其應用。

背景技術

植物生物技術的最新發展不僅實現了傳統農藝性狀的改良(如提高作物產量，增強抗病、抗蟲、抗除草劑特性，改良品質等)，而且使植物成為生物醫藥和工業產品的生物反應器。絕大多數禾本科作物具有產量高、生產成本低、耐儲藏、生產規模容易控制、可直接食用等特點，并且其具備體內翻譯后修飾的能力，因而成為第二代轉基因產物的理想載體。近年來利用水稻種子生產具有保健作用的外源蛋白和可食性疫苗研究發展很快，且已經取得了巨大成功。如維生素A、具有降低血糖作用的大豆球蛋白(Glycinin)、具有預防和治療缺鐵性貧血和提高自身免疫功能的大豆鐵蛋白(Ferritin)、具有刺激胰島素分泌預防糖尿病發生功能的GLP、乙肝疫苗和花粉過敏癥疫苗等均成功地在水稻中表達并高水平累積。然而，進一步實現外源基因的高效表達必須在轉錄和轉錄后水平同時提高基因表達。啟動子主要在轉錄水平調控基因表達，終止子則在轉錄和轉錄后水平同時起調控作用。

盡管目前廣泛應用的終止子，如Nos、Ocs，與異源啟動子組合后可啟動報告基因在植物中的高表達，能夠滿足生物化學、生理學以及細胞定位方面的研究需求。然而，對于其他能夠提高基因表達的終止子研究較少。由于一些重要農藝性狀以及植物次生代謝產物都是由多基因控制，提高單個基因的表達對于相關性狀改良作用不明顯。通過傳統轉化方法，如重復轉化或雜交來實現多基因轉化卻費時費力。近年來發展起來的多基因轉化系統可以在一個表達載體中同時插入多個基因，為了避免轉基因同源性過高引起的轉基因沉默，這些基因需要由不同的啟動子驅動表達，不同的終止子終止轉錄。

發明內容

本發明的一個目的是提供一個終止子，名稱為tCluB-4，該終止子與nos終止子相比，可以提高外源基因的表達水平。

本發明所提供的終止子，為如下1)或2)或3)的DNA分子：

1)由序列表中序列1所示的核苷酸序列組成的DNA分子；

2)與1)限定的DNA的序列至少具有70％、至少具有75％、至少具有80％、至少具有85％、至少具有90％、至少具有95％、至少具有96％、至少具有97％、至少具有98％或至少具有99％同源性的分子；

3)在嚴格條件下與1)或2)限定的DNA序列雜交的分子。

所述嚴格條件可為如下：50℃，在7％十二烷基硫酸鈉(SDS)、0.5M?Na₃PO₄和1mM?EDTA的混合溶液中雜交，在50℃，2×SSC，0.1％SDS中漂洗；還可為：50℃，在7％SDS、0.5M?Na₃PO₄和1mM?EDTA的混合溶液中雜交，在50℃，1×SSC，0.1％SDS中漂洗；還可為：50℃，在7％SDS、0.5M?Na₃PO₄和1mM?EDTA的混合溶液中雜交，在50℃，0.5×SSC，0.1％SDS中漂洗；還可為：50℃，在7％SDS、0.5M?Na₃PO₄和1mM?EDTA的混合溶液中雜交，在50℃，0.1×SSC，0.1％SDS中漂洗；還可為：50℃，在7％SDS、0.5M?Na₃PO₄和1mM?EDTA的混合溶液中雜交，在65℃，0.1×SSC，0.1％SDS中漂洗；也可為：在6×SSC，0.5％SDS的溶液中，在65℃下雜交，然后用2×SSC，0.1％SDS和1×SSC，0.1％SDS各洗膜一次。

其中，序列表中序列1由469個核苷酸組成。

含有所述DNA分子的重組載體、表達盒、轉基因細胞系、重組菌或重組病毒也屬于本發明的保護范圍。