[發明專利]一種牛奶中人乳鐵蛋白篩查試紙條及制備方法

有效

• 申請號: 201110197450.0
• 申請日: 2011-07-13
• 公開（公告）號: CN102879561A
• 公開（公告）日: 2013-01-16
• 發明（設計）人: 劉榜;劉楚新;翟珊莉;張慶德
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/544;G01N33/532
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 張紅兵

技術領域

本發明屬于牛奶轉基因成分的檢測技術領域，與免疫膠體金檢測技術有關。具體涉及一種轉人乳鐵蛋白(human?lactoferrin，簡稱hLF)基因成分的快速簡便的免疫膠體金檢測試紙條及其制備方法。?

背景技術

轉基因動物及轉基因動物產品以其誘人的經濟前景，顯示出強大的生命力，其市場化將是不可扭轉的時代趨勢。然而，鑒于生物安全問題，轉基因動物生產的各個環節都需受到嚴格的控制。因此，一套健全、科學、規范的安全評價體系是必不可少的。其中，可靠、準確的轉基因檢測方法是安全評價體系中的重要環節。?

中國農業大學的李寧教授已經成功培育出了一批轉人乳鐵蛋白轉基因奶牛，數量達到了產業化規模。這標志著我國轉基因奶牛新品種培育和動物乳腺生物反應器技術達到了國際先進水平，鑒于轉人乳鐵蛋白基因奶牛生產技術的成熟以及其產品市場化的趨勢，建立一種快速、簡便的檢測人乳鐵蛋白的方法，有很重要的必要性和緊迫性。?

目前對于轉基因成分的檢測可從外源基因的核酸和蛋白質兩個水平進行，從蛋白質水平進行轉基因成分檢測，具有必要性和可行性，這是因為：只有對目的蛋白質進行檢測，才能反映外源基因的最終表達情況；對于生物反應器制得的蛋白產品，必須對蛋白質進行定性、定量以及生物活性分析；對蛋白質進行檢測，蛋白質樣品制樣較核酸簡單。諸多的蛋白質檢測方法，大致可以分為4類：(1)基于蛋白質的物理化學特性的檢測，如雙向電泳、質譜、色譜等；(2)基于核酸與蛋白質之間的互作的檢測，如鄰位連接技術，是一種依賴于適配子(aptamer，能夠特異地識別并結合蛋白質的DNA或RNA的總稱)的檢測技術(Mats?G.，Simon?F.，Michael?T.，et?al.A?sense?of?closeness：protein?detection?by?proximity?ligation[J].Current?Opinion?in?Biotechnology，2003，14：82-86；Simon?F.，Mats?G.，Jonas?J.，et?al.Protein?detection?using?proximity-dependent?DNA?ligation?assays[J].Nature，2002，20：473-477)；(3)基于蛋白質與蛋白質之間的互作的檢測，如常用的免疫檢測方法，包括western?blot，dot?blot(不需專門的儀器，但是操作繁瑣，不適合做批量檢測)，ELISA(靈敏度高、特異性強、簡單快速、穩定性好、便于自動化檢測等特點，應用性強)，以及免疫組織化學染色法(具有特異性強、靈敏度高、定位準確的特點，便于進行功能研究，但是操作復雜、假陽性率高)等；(4)將對蛋白質的檢測轉化為核酸的檢測，如Bio-bar?code?assay，靈敏度高(Khan?S，Klein?W，Mirkin?CA，et?al.Fluorescent?and?scanometric?ultrasensitive?detection?technologies?with?the?bio-bar?code?assay?for?alzheimer’s?disease[J].Nanoscape，2005，2(1)：7-15)。上述提到的這些方法都比較費時費力，而且需要專業技術人員和專門的儀器設備，基本上只能在實驗室完成，不便于基層推廣。?

膠體金免疫層析(gold-immunochromatography?assay?GICA)是20世紀80年代發展起來的一項新的免疫分析方式，是應用膠體金標記技術，以膠體金作為示蹤物，應用于抗原抗體反應的一種新型免疫標記技術。它具有簡便，快速，特異性強，靈敏度高，費用低的優點。依據膠體金免疫層析技術，在轉基因植物檢測中，已經研制出了多種膠體金免疫層析快速檢測試紙條。?

鑒于轉基因動物及其產品的應用前景，研發快速、靈敏、準確、安全、便捷的轉基因動物及其產品的?檢測方法，為轉基因動物安全評價及轉基因動物的監測和監控提供技術支撐，對于轉基因動物及其產品的安全管理具有重要意義。?

發明內容

本發明的目的是針對轉基因動物蛋白質檢測體系缺乏的現狀，建立一種適用于牛奶中轉人轉人乳鐵蛋白(hLF)的快速檢測試紙條及其制備方法。本發明能準確快速檢測出轉基因牛奶中轉人乳鐵蛋白(hLF)，不需要特殊設備，為基層檢測人員提供一種快速簡便的方法，本發明的方法同時也為轉基因動物及其產品安全評價和管理提供借鑒。?

本發明的總體技術路線圖見圖1所示。?

本發明的技術方案如下：?