[發明專利]分子刪除策略培育精米中無外源基因的轉基因水稻的方法

無效

• 申請號: 201110197435.6
• 申請日: 2011-07-15
• 公開（公告）號: CN102286522A
• 公開（公告）日: 2011-12-21
• 發明（設計）人: 王鋒;胡太蛟;陳在杰;朱顏婷;鄭雪琴;蘇軍;陳松彪;劉華清;陳建民
• 申請（專利權）人: 福建省農業科學院生物技術研究所
• 主分類號: C12N15/82
• 分類號: C12N15/82;A01H4/00;A01H5/00;A01H1/02
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 蔡學俊

1.一種分子刪除策略培育精米中無外源基因的轉基因水稻的方法，包括以下幾個步驟：

1)??????構建基于胚乳特異性表達控制的位點特異性重組系統的水稻轉化載體；所述水稻轉化載體含有以下元件：重組酶識別序列；外源目的基因表達盒；胚乳特異性表達啟動子控制的重組酶基因表達盒以及用于水稻轉化篩選的抗生素抗性表達框；

2)??????利用該水稻轉化載體轉化水稻愈傷組織，篩選、分化產生轉基因水稻植株；

3)??????種植轉基因水稻植株，檢測外源目的基因在轉基因植株中不同部位，包括根、莖、葉、胚及胚乳中的表達水平，獲得外源目的基因在胚乳中被特異性刪除，而在其它組織中均穩定整合并高效表達的轉基因水稻植株；

4)??????種植下一代轉基因水稻株系，進一步分子檢測外源基因的整合及表達，獲得在胚乳中外源轉基因結構已被刪除，而在其它組織中外源轉基因結構能穩定整合與表達并能穩定遺傳的轉基因水稻株系。

2.根據權利要求1所述的分子刪除策略培育精米中無外源基因的轉基因水稻的方法，其特征在于：所述重組酶識別序列是指能被位點特異性重組酶特異識別并剪切的序列。

3.根據權利要求1所述的分子刪除策略培育精米中無外源基因的轉基因水稻的方法，其特征在于：所述外源目的基因是指抗逆基因、抗蟲基因、抗病基因、抗除草劑基因、抗衰老基因、品質改良基因中的一種或由上述基因組成的融合或多價基因。

4.根據權利要求1所述的分子刪除策略培育精米中無外源基因的轉基因水稻的方法，其特征在于：所述胚乳特異性表達啟動子是指在胚乳中特異性表達而在其它部位不表達的啟動子。

5.根據權利要求4所述的分子刪除策略培育精米中無外源基因的轉基因水稻的方法，其特征在于：所述胚乳特異性表達啟動子來源于植物物種的野生型啟動子或修飾后的啟動子。

6.根據權利要求1所述的分子刪除策略培育精米中無外源基因的轉基因水稻的方法，其特征在于：所述重組酶基因是表達產物能特異性識別兩個位點特異序列并剪切、刪除序列間片段的任何野生型重組酶基因，序列突變型重組酶基因或序列修飾后的重組酶基因。

7.根據權利要求1所述的分子刪除策略培育精米中無外源基因的轉基因水稻的方法，其特征在于：所述水稻愈傷組織來自秈稻或粳稻。

8.一種轉基因水稻株系，是利用權利要求1所述的水稻轉化載體培育獲得的轉基因水稻株系及以之為親本通過有性雜交轉育所獲得的水稻材料。