[發(fā)明專利]一種小麥成熟胚培養(yǎng)及再生的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110196692.8
• 申請日: 2011-07-14
• 公開（公告）號(hào): CN102283123A
• 公開（公告）日: 2011-12-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蔣蘇;馬鴻翔;張旭;余桂紅;孫曉波;魏芳
• 申請（專利權(quán)）人: 江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 南京經(jīng)緯專利商標(biāo)代理有限公司 32200
• 代理人: 孫忠浩

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種適合小麥成熟胚愈傷組織誘導(dǎo)及再生的方法。

背景技術(shù)

小麥組織培養(yǎng)為小麥無性系變異、胚挽救、外源基因的轉(zhuǎn)化等工作提供了必要的基礎(chǔ)，而高頻再生則是小麥組織培養(yǎng)的關(guān)鍵。

目前小麥組織培養(yǎng)獲得成功的外植體有根、幼穗、幼胚、花藥、成熟胚等。在這之中，幼胚培養(yǎng)的再生效率最高，而成熟胚培養(yǎng)再生最為困難。然而，幼胚的取材受季節(jié)、時(shí)間以及單株之間不同生理狀態(tài)的限制極大，在自然條件下無法全年持續(xù)供應(yīng)，利用溫室栽培技術(shù)進(jìn)行整年持續(xù)種植則對(duì)條件要求嚴(yán)格且耗資巨大。成熟胚作為外植體源具有易儲(chǔ)藏、取材方便、一次收獲可大量持續(xù)穩(wěn)定供應(yīng)等特點(diǎn)，且具有成本低、個(gè)體間生理狀態(tài)一致、方便實(shí)用等諸多優(yōu)點(diǎn)，因此成為目前研究者進(jìn)行突破的熱點(diǎn)。

小麥成熟胚培養(yǎng)及再生的體系主要受基因型限制極大，不同的體系對(duì)不同的基因型培養(yǎng)效果差異較大。植物愈傷組織的分化是依賴于細(xì)胞分裂素和生長素的比值，該比值高則利于芽的分化，該比值低則利于根的分化。通常小麥成熟胚愈傷組織分化率的平均水平約為23％【M，Turet?M，Altinok?S?et?al.Efficient?callus?induction?and?plant?regeneration?from?mature?embryo?culture?of?winter?wheat(Triticum?aestivum?L.)genotypes.Plant?Cell?Rep，1998，18(3～4)：P.331～335】，如何提高小麥成熟胚愈傷組織分化效率一直是人們關(guān)注的焦點(diǎn)。

小麥成熟胚培養(yǎng)及再生離不開誘導(dǎo)培養(yǎng)基和再生培養(yǎng)基。小麥成熟胚愈傷組織分化率取決于再生培養(yǎng)基，而再生培養(yǎng)基一般是以MS基本培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，添加適量的激素，所述的激素一般包括細(xì)胞分裂素(如：ZT，KT等)和生長素(如：2，4-D，IAA，NAA等)，據(jù)報(bào)道，現(xiàn)有的再生培養(yǎng)基中，細(xì)胞分裂素的添加量一般為0.1～2mg/L，生長素的添加量一般為0.1～1mg/L。例如：激素濃度配比中采用ZT比IAA為2.0mg/L比0.5mg/L【陳俊男，高潤紅，鄧志英，田紀(jì)春.小麥成熟胚組織培養(yǎng)體系優(yōu)化及優(yōu)良轉(zhuǎn)化受體基因型的篩選.山東農(nóng)業(yè)科學(xué).2010，11：P.1-5】、或采用KT比2，4-D為0.1mg/L比0.5mg/L【畢瑞明，王洪剛.小麥成熟胚的組織培養(yǎng).中國農(nóng)學(xué)通報(bào).2007，23卷，2期：P.53-57】或采用1.0～1.5mg/L比0.2～0.5mg/L【劉香利，劉縉，郭藹光，趙惠賢.小麥不同外植體離體培養(yǎng)與再生研究.麥類作物學(xué)報(bào).2008，28(4)：P.568-572；劉芳、周翠紅、李麗雅，侯文卓，王強(qiáng)，郭藹光，劉香利.不同遺傳背景小麥成熟胚再生體系的初步研究.麥類作物學(xué)報(bào).2010，30(1)：P.39-42】、或采用KT比NAA為0.6mg/L比0.4mg/L【曹新有，李春蓮，余玲，任慧莉，陳耀鋒.小麥成熟胚愈傷組織誘導(dǎo)及分化研究.西北植物學(xué)報(bào).2006，26(11)：P.2276-2280；李根英，黃承彥，隋新霞，何中虎，孫其信，夏先春.小麥不同外植體的組織培養(yǎng)效果研究.麥類作物學(xué)報(bào).2006，26(1)：P.21-25】，也有人提出單獨(dú)使用KT0.5～2.0mg/L【貴夢園，魏琦超，何男男，歐行奇，趙俊杰，張勝利，周巖.不同基因型小麥成熟胚愈傷組織的誘導(dǎo)與分化.湖北農(nóng)業(yè)科學(xué).2009(9)，48(9)：P.2049-2051】等。

在本領(lǐng)域，有人認(rèn)為再生培養(yǎng)基中如果KT濃度過高易導(dǎo)致愈傷組織褐化死亡【曹新有，李春蓮，余玲，任慧莉，陳耀鋒.小麥成熟胚愈傷組織誘導(dǎo)及分化研究.西北植物學(xué)報(bào).2006，26(11)：P.2276-2280】，因此較少有人在分化過程中使用超常規(guī)高濃度KT【唐宗祥，張懷瓊，張懷渝，晏本菊，任正隆.2，4-D、KT對(duì)小麥成熟胚愈傷組織形成、分化的影響.四川農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào).2004，22卷，3期：P.203-205】。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于，針對(duì)目前小麥成熟胚愈傷組織分化率的平均水平較低的實(shí)際問題，提供一種新的小麥成熟胚培養(yǎng)及再生的方法。

本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的：一種小麥成熟胚培養(yǎng)及再生的方法，其特征在于，再生培養(yǎng)基以MS基本培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，添加麥芽糖，MES，KT，NAA，再生培養(yǎng)基中麥芽糖的濃度為40g/L，MES濃度為1.95g/L，KT為5mg/L，NAA為0.1mg/L，pH＝5.8；小麥成熟胚培養(yǎng)及再生的具體方法為：