[發明專利]使用腈水解酶突變體生產3-羥基羧酸

有效

• 申請號: 201110195532.1
• 申請日: 2005-08-16
• 公開（公告）號: CN102260693A
• 公開（公告）日: 2011-11-30
• 發明（設計）人: M·S·佩恩;R·迪科西莫;D·P·奧基夫
• 申請（專利權）人: 納幕爾杜邦公司
• 主分類號: C12N15/55
• 分類號: C12N15/55;C12N15/63;C12N1/21;C12N1/19;C12N1/15;C12N1/13;C12P7/42;C12R1/15;C12R1/13;C12R1/065;C12R1/145;C12R1/22;C12R1/42;C12R
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司 72001
• 代理人: 李波;高旭軼

1.如SEQ?ID?NO：11所示的分離的核酸分子。

2.一種包含可操作地連接有合適的調節序列的權利要求1的分離的核酸分子的嵌合基因。

3.一種包含權利要求2的嵌合基因的表達盒。

4.一種包含權利要求2的嵌合基因的轉化的微生物。

5.一種包含權利要求3的表達盒的轉化的微生物。

6.權利要求4的轉化的微生物，其中所述微生物選自：叢毛單胞菌(Comamonas?sp.)、棒狀桿菌(Corynebacterium?sp.)、短桿菌(Brevibacterium?sp.)、紅球菌(Rhodococcus?sp.)、固氮菌(Azotobactersp.)、檸檬酸桿菌(Citrobacter?sp.)、腸桿菌(Enterobacter?sp.)、梭狀芽孢桿菌(Clostridium?sp.)、克雷白氏桿菌(Klebsiella?sp.)、沙門氏菌(Salmonella?sp.)、乳酸桿菌(Lactobacillus?sp.)、曲霉(Aspergillus?sp.)、糖酵母(Saccharomyces?sp.)、接合酵母(Zygosaccharomyces?sp.)、畢赤氏酵母(Pichia?sp.)、克魯維氏酵母(Kluyveromyces?sp.)、假絲酵母(Candida?sp.)、漢森氏酵母(Hansenula?sp.)、杜氏藻(Dunaliella?sp.)、德巴利氏酵母(Debaryomyces?sp.)、毛霉(Mucor?sp.)、球擬酵母(Torulopsis?sp.)、甲基桿菌(Methylobacteria?sp.)、芽孢桿菌(Bacillus?sp.)、埃希氏桿菌(Escherichia?sp.)、假單胞菌(Pseudomonas?sp.)、根瘤菌(Rhizobium?sp.)和鏈霉菌(Streptomyces?sp.)。

7.權利要求6的轉化的微生物，其中所述轉化的微生物是一種大腸桿菌菌株，選自保藏號為ATCC?47076的MG1655、保藏號為ATCC53911的FM5、保藏號為ATCC?27325的W3110、保藏號為ATCC35695的MC4100和保藏號為ATCC?12435的W1485。

8.一種用于將3-羥基腈水解為3-羥基羧酸的方法，包括步驟：(a)將反應混合物水溶液中的3-羥基腈與腈水解酶催化劑接觸，由此所述3-羥基腈被水解為相應的3-羥基羧酸，所述腈水解酶催化劑為權利要求1的分離的核酸分子所編碼；和(b)任選地分離步驟(a)中產生的3-羥基羧酸。

9.權利要求8的方法，其中所述3-羥基腈是3-羥基戊腈或3-羥基丁腈。

10.一種用于將3-羥基戊腈水解為3-羥基戊酸的方法，包括步驟：(a)將反應混合物水溶液中的3-羥基戊腈與權利要求1的分離的核酸分子編碼的腈水解酶催化劑接觸，由此所述3-羥基戊腈被水解為3-羥基戊酸；和(b)任選地分離步驟(a)中產生的3-羥基戊酸。