[發明專利]一種植物不育系和恢復系的制備方法和應用有效
| 申請號： | 201110192597.0 | 申請日： | 2011-07-11 |
| 公開（公告）號： | CN102250947A | 公開（公告）日： | 2011-11-23 |
| 發明（設計）人： | 劉勝毅;石磊;董彩華 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院油料作物研究所 |
| 主分類號： | C12N15/84 | 分類號： | C12N15/84;A01H5/00;A01H1/02 |
| 代理公司： | 武漢宇晨專利事務所 42001 | 代理人： | 王敏鋒 |
| 地址： | 430062 湖*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 植物 不育 恢復 制備 方法 應用 | ||
1.一種植物恢復系的制備方法，其步驟是：
A：人工創建恢復系的引物設計：
利用SDS裂解法提取油菜DNA，以DNA為模板，進行PBnPABP5啟動子的擴增，引物為：PBnPABP5A，GACATCTAGACGCTGTCGTTGGGGCAATTC；?PBnPABP5S，CAGAAGCTTAAAAGACTTACCGAGTTGAACC；利用Trirol進行油菜花蕾RNA的提取，以RNA反轉錄的cDNA為模板進行BnPABP5基因的擴增，引物為：BnPABP5A，?GACGAGCTC?TCACTCCGTTGAGGAGGG；?BnPABP5S，GACATCTAGAATGGTTGATCAAGTCATCCC；
B：恢復系的制備：
以油菜DNA為模板進行PBnPABP5啟動子PCR擴增，引物為PBnPABP5A和PBnPABP5S，反應體系為25?μL內含:1×PCR?buffer,?MgCI?1.5?mmol/L，dNTP?0.2?mmol/L、引物濃度為0.5?mol/L，Pfu酶1.5單位，模板100ng，PCR反應程序：94℃?5?min；94℃?30?sec，55℃?45?sec，72℃?1?min，32個循環；72°C延伸8?min，反應完成后用凝膠回收試劑盒回收并純化目的片段，獲得PBnPABP5啟動子序列，以油菜花蕾cDNA為模板進行BnPABP5基因的PCR擴增，引物為BnPABP5A和BnPABP5S，反應體系同PBnPABP5啟動子的擴增，PCR反應程序：94℃?5?min；94℃?30?sec，55℃?45?sec，72℃?1?min，32個循環；72°C延伸8?min，完成后用凝膠回收試劑盒回收純化目的片段，獲得BnPABP5基因序列，用獲得的PBnPABP5啟動子序列和BnPABP5基因序列分別替換pBI121植物表達載體中的CaMV35S序列和GUS序列，構建PBnPABP5驅動的PABP5基因的植物過表達載體，進行擬南芥植株的轉化，獲得陽性植株，該陽性植株即為人工創建的恢復系。
2.權利要求1所述的一種植物恢復系在油菜雜交制種中的應用。
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