[發明專利]用兼養和富氮-缺氮兩階段培養策略提高產油微藻生物量和油脂累積的方法無效

申請號：	201110192159.4	申請日：	2011-07-11
公開（公告）號：	CN102268377A	公開（公告）日：	2011-12-07
發明（設計）人：	劉和;張姍姍;范金鳳;符波;張麗娟	申請（專利權）人：	江南大學
主分類號：	C12N1/12	分類號：	C12N1/12;C12R1/89
代理公司：	無錫市大為專利商標事務所 32104	代理人：	時旭丹;劉品超
地址：	214122 江蘇省無錫市濱湖區***	國省代碼：	江蘇;32
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摘要：
搜索關鍵詞：	用兼養缺氮兩階段培養策略提高產油生物量油脂累積方法
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【說明書】：

技術領域

采用兼養和富氮-缺氮兩階段培養策略提高產油微藻S.dimorphus生物量和油脂累積的方法，通過往BG11培養基中添加有機碳源葡萄糖可以提高微藻的生物量，同時在微藻達到穩定期后提供氮缺陷條件，可以有效提高微藻的總脂含量。屬于微藻生物能源技術領域。

背景技術

微藻是水生植物的一種，主要以光為能源，以二氧化碳為碳源進行光合作用來積累有機物質。目前微藻的培養方式主要為光合自養培養，這是由其本身的特性所決定的。然而，由于自養培養細胞密度低，采收成本高，限制了微藻作為生物柴油之原料。而采用適當添加有機碳源進行兼養培養近年來成為國內外藻類生物學領域關注的熱點問題。兼養培養具有可以直接利用現有的發酵設備、提高生物量和活性物質的產量等優越性，有利于提高微藻生物量和胞內活性物質產量。但迄今為止，能夠進行兼養和異養生長的微藻物種有限，并且制約微藻兼養和異養生長的機理尚不清楚。

另外，培養液的營養成分特別是一些必需營養鹽氮、磷、硅等對微藻油脂的含量及組成有較大影響。普遍認為，氮缺陷可以促進產油微藻油脂的累積，其原因可能為氮源充足時，細胞生長旺盛，蛋白質、脂類和核酸等生物活性物質均正常合成，因此所得脂肪酸含量較低。但氮源缺乏時，蛋白質和核酸等含氮化合物的合成受到限制，而含氮元素較少的貯存脂類和絕大多數膜質仍能繼續合成，因此在細胞干重中的百分含量增加。

發明內容

本發明的目的是提供一種提高微藻生物量和油脂累積的方法，通過添加有機碳源葡萄糖提高微藻生物量和提供富氮-缺氮條件促進油脂積累，得到一種促進微藻生物量和油脂含量同時得到提高的兩階段培養策略，促進微藻產生物柴油產業化。

本發明的技術方案：一種提高產油微藻S.dimorphus生物量和油脂累積的方法，采用兼養和富氮-缺氮兩階段培養策略，首先將微藻S.dimorphus，藻（Scenedesmus.?dimorphus），已在[安徽農業科學]2008，36（23）公開，接種到添加了1.2?~?5.4?g/L葡萄糖的BG11培養基中，初始pH為7，溫度25℃，光照6600lux，無機氮源NaNO₃的濃度為1.5g/L，通氣培養至穩定期，然后將藻液離心濃縮，接種到NaNO₃的濃度為0.3g/L的缺氮培養基中，繼續培養至穩定。培養時間為14~16d。采用BG11培養基的組成是，NaNO₃：1.5g/L,?K₂HPO₄·3H₂O：0.04g/L，MgSO₄·7H₂O：0.075g/L,?CaCl₂·2H₂O：0.036g/L,?檸檬酸：0.006g/L,?檸檬酸鐵銨：0.006g/L,?EDTA?：0.001g/L,?Na₂CO₃：0.02g/L,?A₅溶液1mL；微量元素溶液A₅的組成是，H₃BO₃：2.86g/L,?MnCl₂·4H₂O：1.81g/L，ZnSO₄·7H₂O：0.222g/L，CuSO₄·5H₂O：0.079g/L，Co(NO₃)₂·6H₂O：0.0494g/L，NaMoO₄·?2H₂O：0.390g/L。