[發(fā)明專利]一種功能性乳酸菌胞外多糖的制備方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201110191610.0 | 申請日： | 2011-07-11 |
| 公開（公告）號： | CN102250984A | 公開（公告）日： | 2011-11-23 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 潘道東;曾小群;曹錦軒 | 申請（專利權(quán)）人： | 寧波大學(xué) |
| 主分類號： | C12P19/04 | 分類號： | C12P19/04;C08B37/00;A61P39/06;A61P37/04;C12R1/01 |
| 代理公司： | 寧波奧圣專利代理事務(wù)所(普通合伙) 33226 | 代理人： | 程曉明 |
| 地址： | 315211 浙*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 功能 乳酸菌 多糖 制備 方法 | ||
1.一種功能性乳酸菌胞外多糖的制備方法，其特征在于具體包括如下步驟：
（1）乳酸菌胞外粗多糖的制備
將乳酸乳球菌乳亞種菌株發(fā)酵劑按體積百分比3.0-5.0%的接種量，接種在改進的BLX培養(yǎng)基上，先在37℃下培養(yǎng)20?h，再在28-32℃下培養(yǎng)10-15h，6000-7000rpm離心15-20min除去菌體細胞得含胞外多糖的發(fā)酵液，然后對發(fā)酵液進行超濾濃縮，再按濃縮液質(zhì)量的10%的加入三氯醋酸沉淀，0-4oC下放置8-12小時，然后6000-7000rpm離心15-20min，取上清液進行超濾濃縮，得粗多糖濃縮液，再加入體積為粗多糖濃縮液3倍的90-95%的乙醇溶液，在4℃靜置10-12小時，然后6000-7000rpm離心20-25min，取沉淀物冷凍干燥，得粉末狀的乳酸菌胞外粗多糖；
（2）乳酸菌胞外粗多糖的分離純化
將步驟（1）獲得的乳酸菌胞外粗多糖溶解于少量蒸餾水中，先經(jīng)DEAE-纖維素離子交換柱分離純化，收集含有乳酸菌胞外粗多糖的第一洗脫峰的洗脫液，冷凍濃縮至5-6mL后，再經(jīng)Sepharose?CL-6B凝膠柱層析分離純化，收集含有乳酸菌胞外粗多糖的第二洗脫峰的洗脫液，將洗脫液經(jīng)截留分子量為280-320道爾頓的納濾膜納濾脫鹽，再經(jīng)超濾濃縮，90-95%的乙醇溶液沉淀，取沉淀物冷凍干燥，得到乳酸菌胞外純多糖；
（3）乳酸菌胞外純多糖的磷酸化
將步驟（2）得到的乳酸菌胞外純多糖與磷酸鹽溶液按質(zhì)量比6:1～3的比例混勻，并調(diào)節(jié)pH至4.0-6.0,?冷凍干燥，至粉末狀，然后移至干燥箱內(nèi)，在70-90℃下加熱反應(yīng)4-6h，然后用70-75%的乙醇溶液沖洗除去多余的鹽類，再置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中蒸餾2-3小時，除去殘留的乙醇，真空冷凍干燥，獲得固體磷酸化多糖?，其中磷酸根接枝量達到1.64-1.70?mg/g；
（4）硒酸化
將步驟（3）獲得的固體磷酸化多糖溶于水中得到質(zhì)量百分比為15%的磷酸化多糖溶液，將磷酸化多糖溶液與硒化劑按質(zhì)量比9:1的比例混勻，并調(diào)節(jié)pH至1.5-2.5，?冷凍干燥至粉末狀，然后移至干燥箱內(nèi)，在45-55℃下加熱反應(yīng)12-15h，然后用70-75%的乙醇溶液沖洗除去多余的硒化劑，再置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中蒸餾，除去殘留的乙醇，放入透析袋內(nèi)，置于蒸餾水中透析除去殘留的硒化劑，透析結(jié)束后，將透析袋內(nèi)的多糖溶液到入燒杯，加入3倍多糖溶液體積的90-95%乙醇沉淀，4℃靜置10-12小時，6000-7000rpm離心20-25min，取沉淀物冷凍干燥，即得磷酸化及硒酸化多糖產(chǎn)物即功能性乳酸菌胞外多糖，其中硒的含量為0.17-0.18?mg/g。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種功能性乳酸菌胞外多糖的制備方法，其特征在于：
所述的乳酸乳球菌乳亞種菌株發(fā)酵劑的活菌數(shù)含量達到105-7個/mL。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種功能性乳酸菌胞外多糖的制備方法，其特征在于所述的改進BLX培養(yǎng)基，其組成如下：1.5-2.0%葡萄糖，1.0-1.2%果糖，1.3-1.5%大豆蛋白胨，1.3-1.5%胰蛋白胨，初始pH為6.0-6.5。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種功能性乳酸菌胞外多糖的制備方法，其特征在于步驟（1）和步驟（2）中所述的超濾濃縮過程為：采用裝有孔徑為50千道爾頓內(nèi)壓式中空纖維膜，在操作壓力為0.25-0.40MPa，操作溫度為20-25℃的條件下，對乳酸乳球菌乳亞種發(fā)酵液中胞外多糖進行超濾濃縮。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種功能性乳酸菌胞外多糖的制備方法，其特征在于：步驟（3）中所述的磷酸鹽溶液為磷酸鹽與水按質(zhì)量比20:1的比例混合而成。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種功能性乳酸菌胞外多糖的制備方法，其特征在于：所述的磷酸鹽為六偏磷酸鈉（Na6P6O18）、三聚磷酸鈉(Na5P3O10)和焦磷酸鈉(Na4P2O7)中的任一種。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種功能性乳酸菌胞外多糖的制備方法，其特征在于：步驟（4）中所述的硒化劑指乙酸硒醚或亞硒酸鈉或二者混合物。
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于寧波大學(xué)，未經(jīng)寧波大學(xué)許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作，請聯(lián)系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201110191610.0/1.html，轉(zhuǎn)載請聲明來源鉆瓜專利網(wǎng)。
