[發明專利]環(苯丙氨酰-N-甲基亮氨酰-亮氨酰-N-甲基亮氨酰-亮氨酰)及其合成方法與應用

有效

• 申請號: 201110189548.1
• 申請日: 2011-07-07
• 公開（公告）號: CN102329376A
• 公開（公告）日: 2012-01-25
• 發明（設計）人: 徐石海;徐牧吾
• 申請（專利權）人: 暨南大學
• 主分類號: C07K7/64
• 分類號: C07K7/64;C07K1/06;A61K38/12;A61P35/00
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 裘暉;陳燕嫻

1.環(苯丙氨酰-N-甲基亮氨酰-亮氨酰-N-甲基亮氨酰-亮氨酰)，其特征在于具有如式(I)所示的結構，

2.權利要求1所述的環(苯丙氨酰-N-甲基亮氨酰-亮氨酰-N-甲基亮氨酰-亮氨酰)的合成方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)在惰性氣體保護下，取四氫呋喃與水混合作為溶劑，冷卻至0℃；加入L-亮氨酸，再加入NaOH溶液和二碳酸二叔丁酯，冰浴下攪拌10min；然后解除冰浴，讓反應體系自然升溫至20-30℃并調節pH值為10～11，攪拌過夜；蒸除溶劑，再用無水乙醚萃取，冰浴下調節其水相溶液的pH值為2；再用乙酸乙酯萃取，將得到的有機相溶液洗滌、干燥、過濾并蒸除溶劑后得到叔丁基氧羰基-L-亮氨酸；

(2)在惰性氣體保護下，將步驟(1)得到的叔丁基氧羰基-L-亮氨酸加入到四氫呋喃中，冷卻至0℃；滴加入碘甲烷，反應30min，再加入氫化鈉；讓反應體系自然升溫至20-30℃，反應過夜；冰水浴下，滴加入飽和氯化銨水溶液和飽和碳酸氫鈉水溶液，蒸除四氫呋喃；余下溶液用石油醚洗滌；冰水浴冷卻下，調節反應體系pH值為2～3，加入乙酸乙酯萃取，將得到的有機相溶液洗滌、干燥、過濾并濃縮，得到N-叔丁基氧羰基-甲基亮氨酸；

(3)取L-亮氨酸與苯甲醇、對甲苯磺酸、甲苯混合，加熱回流6小時，反應物冷卻后加入乙醚稀釋，然后用飽和碳酸鈉水溶液洗滌，再用乙醚萃取，將得到的有機相溶液干燥、過濾、蒸除溶劑、重結晶后得到亮氨酸芐酯磺酸鹽；

(4)在惰性氣體保護下，取L-苯丙氨酸與四氫呋喃、水、NaOH溶液混合，冷卻至0℃；加入二碳酸二叔丁酯，反應20分鐘后，滴加NaOH溶液調節反應體系pH值為10～10.5；讓反應體系自然升溫至20-30℃，反應過夜；然后蒸除四氫呋喃，余下溶液用乙醚萃取，冰水浴下調節其水相溶液的pH值為2；再用乙酸乙酯萃取，將得到的有機相溶液洗滌、干燥、過濾并蒸去溶劑得到叔丁基氧羰基苯丙氨酸；

(5)在惰性氣體保護下，取步驟(2)得到的N-叔丁基氧羰基-甲基亮氨酸溶于四氫呋喃中，置于冰水浴中，攪拌中連續加入3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-苯并三嗪-4-酮、N，N-二異丙基乙胺；再加入步驟(3)得到的亮氨酸芐酯磺酸鹽，解除冰水浴讓反應體系自然升溫至20-30℃；待N-叔丁基氧羰基-甲基亮氨酸與亮氨酸芐酯磺酸鹽的反應完成后，蒸除溶劑，分離產物得到叔丁基氧羰基-N-甲基亮氨酰-亮氨酸芐酯二肽；

(6)在惰性氣體保護下，取步驟(4)得到的叔丁基氧羰基苯丙氨酸溶于四氫呋喃中，冷卻至0℃，冰水浴下連續加入3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-苯并三嗪-4-酮、N，N-二異丙基乙胺；然后滴加入步驟(5)得到的叔丁基氧羰基-N-甲基亮氨酰-亮氨酸芐酯二肽，取消冰水浴；待叔丁基氧羰基苯丙氨酸與叔丁基氧羰基-N-甲基亮氨酰-亮氨酸芐酯二肽的反應完成后，過濾，取濾液，蒸除四氫呋喃，分離產物得到叔丁基氧羰基苯丙氨酰-N-甲基-亮氨酰-亮氨酸芐酯三肽；

(7)取步驟(5)得到的叔丁基氧羰基-N-甲基亮氨酰-亮氨酸芐酯二肽溶解于二氯甲烷中，氮氣保護下加入苯甲醚，冰水浴下攪拌中加入三氟乙酸，反應3～6小時；蒸除三氟乙酸，補充二氯甲烷，再蒸除三氟乙酸，重復該操作3～5次；將產物干燥，得到N-甲基亮氨酰-亮氨酸芐酯；

將步驟(6)得到的叔丁基氧羰基苯丙氨酰-N-甲基-亮氨酰-亮氨酸芐酯三肽溶于甲醇中，在氮氣保護下加入10％鈀碳，再通入氫氣，在20-30℃下反應；反應完成后，將產物過濾，取濾液，回收10％鈀碳，蒸除甲醇，干燥，得到叔丁基氧羰基苯丙氨酰-N-甲基-亮氨酰-亮氨酸；

取叔丁基氧羰基苯丙氨酰-N-甲基-亮氨酰-亮氨酸溶于四氫呋喃中，冰水浴中氮氣保護下加入3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-苯并三嗪-4-酮、N，N-二異丙基乙胺；滴加入N-甲基亮氨酰-亮氨酸芐酯，取消冰水浴；反應完成后，蒸除四氫呋喃，分離產物得到叔丁基氧羰基苯丙氨酰-N-甲基-亮氨酰-亮氨酰-N-甲基亮氨酰-亮氨酸芐酯；

(8)將步驟(7)得到的叔丁基氧羰基苯丙氨酰-N-甲基-亮氨酰-亮氨酰-N-甲基亮氨酰-亮氨酸芐酯溶于乙酸乙酯中，通入氮氣后加入10％鈀碳，再通入氫氣，20-30℃下反應4-6小時，過濾回收鈀碳，取濾液，蒸干乙酸乙酯，即得到苯丙氨酰-N-甲基-亮氨酰-亮氨酰-N-甲基亮氨酰-亮氨酸芐酯；

取苯丙氨酰-N-甲基-亮氨酰-亮氨酰-N-甲基亮氨酰-亮氨酸芐酯溶解于二氯甲烷中，冰水浴下攪拌中加入三氟乙酸，反應3～6小時，蒸除三氟乙酸，補充二氯甲烷，再蒸除三氟乙酸，重復該操作3～5次；將產物干燥得到苯丙氨酰-N-甲基-亮氨酰-亮氨酰-N-甲基亮氨酰-亮氨酸；

將苯丙氨酰-N-甲基-亮氨酰-亮氨酰-N-甲基亮氨酰-亮氨酸溶于四氫呋喃/二氯甲烷/乙腈混合溶劑中，20-30℃下連續加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯、3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-苯并三嗪-4-酮、O-(7-偶氮苯并三氮唑-1-氧)-N，N，N′，N′-四甲基脲六氟磷酸酯；反應結束后，蒸除混合溶劑；將產物用二氯甲烷溶解，依次用飽和碳酸氫鈉、水洗滌產物，再將產物干燥、濃縮、分離，得到環(苯丙氨酰-N-甲基亮氨酰-亮氨酰-N-甲基亮氨酰-亮氨酰)；

步驟(8)所述的四氫呋喃/二氯甲烷/乙腈混合溶劑中，四氫呋喃、二氯甲烷、乙腈三者的體積比為2∶1∶2；

所述步驟(7)和(8)中，初始加入的二氯甲烷與TFA的體積比為4∶1。