[發明專利]一種制備山荷葉素的方法

無效

• 申請號: 201110187923.9
• 申請日: 2011-07-06
• 公開（公告）號: CN102304123A
• 公開（公告）日: 2012-01-04
• 發明（設計）人: 劉東鋒;郭琴
• 申請（專利權）人: 南京澤朗醫藥科技有限公司
• 主分類號: C07D407/04
• 分類號: C07D407/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于中藥有效活性成分提取制備領域，涉及一種制備山荷葉素的方法。?

背景技術

山荷葉素（diphyllin）是近期所發現的具有抗腫瘤活性的新結構的天然產物，分子式：C₂₁H₁₆O₇，分子量：380.353，屬于4-苯代-2，3-萘內酯類。主要從爵床科、小檗科、蕓香科等多種植物中提取分離得到。藥理研究表明，Diphyllin具有較好的抗腫瘤活性，對于人鼻咽癌細胞(KB)的ED50<3μmol/mL。研究發現Diphyllin類化合物能夠作用于細胞分裂周期的S期，Gl期，使細胞分裂停留在G1期，對于S期有很強的抑制作用。實驗證明，用于HCTll6細胞時，在24小時內，能夠使S期的細胞的比率從70％下降到41％，而使Gl期細胞所占比重由21％增加到42％，對MCF-7細胞也有類似的結果。Diphyllin類化合物具有廣泛的生理活性，已引起許多藥學家、化學家的廣泛關注。?

國內有關制備山荷葉素的方法報道較少，張永利采用醇提、溶劑萃取及各種柱色譜反復分離純化得到各單體成分，操作繁瑣、樣品損失嚴重，不適合工業生產制備。中國專利（申請號201010535341.0）公開了一種乙醇熱回流、乙酸乙酯-水混合溶劑多級逆流萃取、大孔樹脂柱層析、丙酮結晶的方法制備山荷葉素，該方法萃取率低、工藝不穩定。現有技術中，尚無采用高速逆流色譜法分離純化山荷葉素的工藝報道。?

發明內容

本發明的目的是提供一種采用凝膠柱色譜和高速逆流色譜技術結合的方法分離制備山荷葉素，該方法制備量大、生產周期短、工藝穩定、溶劑消耗少、產品純度高。?

為達到上述目的，本發明采用下列技術方案：?

取南方山荷葉或爵床的醇提物用95%乙醇溶解后上凝膠柱層析，收集含山荷葉素的流分，回收溶劑得山荷葉素粗提物，將山荷葉素粗提物用高速逆流色譜進行進一步分離純化，最終得到高純度的山荷葉素單體成分。

所述南方山荷葉或爵床的醇提物是以乙醇或甲醇為溶媒，采用加熱回流、超聲、微波等常用的現有技術提取得到的醇提物。?

所述凝膠柱層析洗脫條件為二氯甲烷-甲醇10:1-2:1梯度洗脫。?

高速逆流色譜分離的溶劑體系為烷烴-脂肪酸酯-脂肪醇-水組成的溶劑體系，其中烷烴是正己烷、正庚烷或石油醚，脂肪酸值是乙酸乙酯，脂肪醇是甲醇或乙醇，其配比為1：（0.4-0.9）：1：（0.4-0.9），以下相為流動相。?

采用本發明方法制備山荷葉素，制備量大、生產周期短、工藝穩定、溶劑消耗少、產品純度高。?

下面將結合具體實施例對本發明作進一步闡述，但本發明要求保護的范圍并不局限于下列實施方式。?

具體實施方式

實施例1：?

取南方山荷葉醇提物用95%乙醇溶解，上Sephadex?LH-20凝膠柱層析，并用二氯甲烷-甲醇混合溶劑梯度洗脫，即用二氯甲烷-甲醇體積比分別為10:1、8:11、6:1、4:1、2:1的混合溶劑進行洗脫，收集含有山荷葉素的洗脫部分減壓旋轉蒸發濃縮，得濃縮液，然后采用高速逆流色譜分離濃縮液，在室溫下將溶劑系統正己烷-乙酸乙酯-甲醇-水按體積比1:0.5:1:0.7置于分液漏斗中振搖，放置，分別取上、下相，將上相作為固定相，下相作為流動相，將固定相泵入色譜柱中，使柱中充滿固定相后，再讓儀器以800rpm轉動，同時將流動相以2.3ml/min的流速泵入，待流動相從出液端流出且兩相在色譜中達到動態平衡后，將樣品溶液注入色譜系統中，同時在出液端接紫外檢測器，在215nm波長處對流出液連續檢測，與山荷葉素標準圖譜對應，收集并蒸除溶劑，干燥，得產品，經HPLC檢測，其純度為97.5%。

實施例2：?