[發(fā)明專(zhuān)利]用于區(qū)分原發(fā)性肺癌與癌旁組織的microRNA標(biāo)志物

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201110182978.0
• 申請(qǐng)日: 2011-06-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN102851282A
• 公開(kāi)（公告）日: 2013-01-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 何祥火;梁琳慧;陸舜;陳智偉;虞永峰
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 上海市腫瘤研究所
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/113
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/113;C12N15/63;C12Q1/68
• 代理公司: 上海一平知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31266
• 代理人: 祝蓮君;雷芳

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，本發(fā)明涉及一類(lèi)可用于區(qū)分原發(fā)性肺癌與癌旁組織的microRNA標(biāo)志物及其用途。本發(fā)明還涉及檢測(cè)所述microRNA標(biāo)志物的芯片和試劑盒。

背景技術(shù)

肺癌是我國(guó)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，惡性程度高，發(fā)展迅速，治療困難，病死率高。因此，肺癌的盡早診斷就愈發(fā)顯得迫切。

任何事物的發(fā)生發(fā)展都處于內(nèi)外因共同作用之下，內(nèi)因?yàn)橹鳎庖驗(yàn)檩o。基因作為生命的遺傳介質(zhì)，在生物體的生、老、病、死中處于基礎(chǔ)的內(nèi)因地位。絕大部分基因通過(guò)轉(zhuǎn)錄生成核糖核酸，再翻譯生成蛋白質(zhì)而發(fā)揮生物學(xué)功能。

microRNA(miR或miRNA，微小RNA)是一類(lèi)在較高等的真核生物體內(nèi)廣泛存在的，長(zhǎng)度約18-26個(gè)堿基的單鏈RNA分子。它可以通過(guò)堿基配對(duì)原則特異性地與一些mRNA上的靶位點(diǎn)相結(jié)合，引起靶mRNA降解或翻譯抑制，進(jìn)而在轉(zhuǎn)錄后水平對(duì)靶基因進(jìn)行調(diào)控。

microRNA來(lái)源于長(zhǎng)度約1000bp的長(zhǎng)鏈RNA初始轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物(Pri-miRNA)，Pri-miRNA分子在細(xì)胞核中經(jīng)Drosha酶剪切形成長(zhǎng)度約60-80nt的具有莖環(huán)結(jié)構(gòu)的miRNA前體(Pre-miRNA)。Pre-miRNA轉(zhuǎn)運(yùn)至胞質(zhì)后，被Dicer酶進(jìn)一步切割成長(zhǎng)約22nt的雙鏈miRNA。雙鏈miRNA解開(kāi)后，成熟的miRNA進(jìn)入RNA誘導(dǎo)基因沉默復(fù)合物(RNA-induced?silencing?complex，RISC)，與互補(bǔ)mRNA完全或不完全配對(duì)，降解靶mRNA或阻遏其表達(dá)。

盡管microRNA在細(xì)胞總RNA中所占的比重很小，但由于它可以高效地對(duì)所有具有靶位點(diǎn)的mRNA產(chǎn)生調(diào)控作用，microRNA在生物體的發(fā)育乃至腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程所起的作用仍不可小視。

然而，迄今為止，本領(lǐng)域?qū)τ谂c腫瘤(如肺癌)相關(guān)的microRNA了解甚少，因此本領(lǐng)域迫切需要進(jìn)一步地分離各種microRNA，尤其是與腫瘤的發(fā)生、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)或檢測(cè)有關(guān)的microRNA。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的就是提供一類(lèi)新的、可用于區(qū)分原發(fā)性肺癌癌組織及癌旁組織的microRNA標(biāo)志物及其用途。

本發(fā)明的另一目的是提供檢測(cè)所述microRNA標(biāo)志物的芯片和試劑盒。

在本發(fā)明的第一方面，提供了一種分離的miRNA，所述的miRNA選自：

(i)序列如SEQ?ID?NO：38所示的miRNA，其中n為選自1-38的正整數(shù)；或

(ii)與SEQ?ID?NO：n所示序列互補(bǔ)的miRNA。

在另一優(yōu)選例中，所述的miRNA分離自人。

在本發(fā)明的第二方面，提供了一種miRNA集(set)或組合(combination)，所述的集或組合由序列如SEQ?ID?NO：1-38所示的38種miRNA所構(gòu)成。

在本發(fā)明的第三方面，提供了一種分離的或人工構(gòu)建的前體miRNA，所述的前體miRNA能在人細(xì)胞內(nèi)剪切并表達(dá)成本發(fā)明第一方面中所述的miRNA。

在本發(fā)明的第四方面，提供了一種分離的多核苷酸，所述的多核苷酸能被人細(xì)胞轉(zhuǎn)錄成前體miRNA，所述的前體miRNA能在人細(xì)胞內(nèi)被剪切且表達(dá)成本發(fā)明第一方面中所述的miRNA。

在另一優(yōu)選例中，所述的多核苷酸具有式I所示的結(jié)構(gòu)：

Seq_正向-X-Seq_反向????????式I，

式I中，

Seq_正向為能在人細(xì)胞中表達(dá)成所述的miRNA的核苷酸序列；

Seq_反向為與Seq_正向基本上互補(bǔ)或完全互補(bǔ)的核苷酸序列；

X為位于Seq_正向和Seq_反向之間的間隔序列，并且所述間隔序列與Seq_正向和Seq_反向不互補(bǔ)；

并且式I所示的結(jié)構(gòu)在轉(zhuǎn)入人細(xì)胞后，形成式II所示的二級(jí)結(jié)構(gòu)：

式II中，Seq_正向、Seq_反向和X的定義如上述，

||表示在Seq_正向和Seq_反向之間形成的堿基互補(bǔ)配對(duì)關(guān)系。

在本發(fā)明的第五方面，提供了一種載體，它含有本發(fā)明第一方面中所述的miRNA，或第四方面中所述的多核苷酸。