[發(fā)明專利]截短的人乳頭瘤病毒52型L1蛋白

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110182799.7
• 申請日: 2011-07-01
• 公開（公告）號: CN102268076A
• 公開（公告）日: 2011-12-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李少偉;莫小兵;魏旻希;潘暉榕;張軍;夏寧邵
• 申請（專利權(quán)）人: 廈門大學(xué);廈門萬泰滄海生物技術(shù)有限公司
• 主分類號: C07K14/025
• 分類號: C07K14/025;C12N15/37;C12N15/63;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N5/10;C12N7/00;C12P21/02;A61K39/12;A61K48/00;A61P31/20;A61P35/00
• 代理公司: 中國國際貿(mào)易促進(jìn)委員會專利商標(biāo)事務(wù)所 11038
• 代理人: 羅菊華

1.一種截短的HPV52?L1蛋白或其變體，其與野生型HPV52?L1蛋白相比，N端截短了27-42個(gè)氨基酸，例如27個(gè)、28個(gè)、29個(gè)、30個(gè)、31個(gè)、32個(gè)、33個(gè)、34個(gè)、35個(gè)、36個(gè)、37個(gè)、38個(gè)、39個(gè)、40個(gè)、41個(gè)或42個(gè)氨基酸；

例如，與野生型HPV52?L1蛋白相比，該截短的HPV52?L1蛋白N端截短了27-42個(gè)氨基酸，例如27個(gè)、35個(gè)、38個(gè)、40個(gè)或42個(gè)氨基酸；

例如，該截短的HPV52L1蛋白具有SEQ?ID?NO：1、SEQ?ID?NO：2、SEQ?ID?NO：3、SEQ?ID?NO：4、SEQ?ID?NO：5、SEQ?ID?NO：6、SEQ?ID?NO：7、SEQ?ID?NO：8、SEQ?ID?NO：9、SEQ?ID?NO：10、SEQID?NO：11、SEQ?ID?NO：12或SEQ?ID?NO：13所示的氨基酸序列，例如具有SEQ?ID?NO：1、SEQ?ID?NO：7、SEQ?ID?NO：10、SEQ?ID?NO：12或者SEQ?ID?NO：13所示的氨基酸序列，更優(yōu)選地具有SEQ?ID?NO：12所示的氨基酸序列。

2.一種分離的核酸，其編碼權(quán)利要求1的截短的HPV52?L1蛋白或其變體。

3.包含權(quán)利要求2的分離的核酸的載體。

4.包含權(quán)利要求2的分離的核酸和/或權(quán)利要求3的載體的宿主細(xì)胞。

5.一種HPV52病毒樣顆粒，其含有權(quán)利要求1的截短蛋白或其變體，或者由權(quán)利要求1的截短蛋白或其變體組成。

6.一種組合物，其包含權(quán)利要求1的截短的HPV52?L1蛋白或其變體，或權(quán)利要求2的分離的核酸，或權(quán)利要求3的載體，或權(quán)利要求4的宿主細(xì)胞，或權(quán)利要求5的HPV52病毒樣顆粒。

7.一種藥物組合物或疫苗，其包含權(quán)利要求5的HPV52病毒樣顆粒，任選地還包含藥學(xué)可接受的載體和/或賦形劑，

優(yōu)選地，所述HPV52病毒樣顆粒以預(yù)防HPV感染或?qū)m頸癌有效量存在；

優(yōu)選地，所述藥物組合物或疫苗還包含至少一種選自下列的病毒樣顆粒：HPV6?L1蛋白病毒樣顆粒，HPV11?L1蛋白病毒樣顆粒，HPV16L1蛋白病毒樣顆粒，HPV18?L1蛋白病毒樣顆粒，HPV31L1蛋白病毒樣顆粒，HPV33L1蛋白病毒樣顆粒，HPV45L1蛋白病毒樣顆粒和HPV58L1蛋白病毒樣顆粒。

8.獲得截短的HPV52L1蛋白的方法，其包括利用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)權(quán)利要求1的截短的HPV52?L1蛋白，然后將含有該蛋白的裂解上清進(jìn)行純化處理，

優(yōu)選地，所述方法包括步驟：

a)在大腸桿菌中表達(dá)所述截短蛋白，

b)將表達(dá)所述截短蛋白的大腸桿菌在鹽濃度為100mM-600mM的溶液中破碎，分離得到上清液，

c)用水或低鹽溶液將b)獲得的上清液的鹽濃度降至100mM或以下，并收集沉淀，

d)將c)獲得的沉淀在150mM-250mM鹽溶液中重新溶解，同時(shí)加入還原劑，分離得到溶液，該溶液中含純度至少50％的截短的HPV52L?1蛋白。

9.制備權(quán)利要求5的HPV52病毒樣顆粒的方法，其包括步驟：

a)將純度至少50％的權(quán)利要求1的截短的HPV52L1蛋白通過色譜層析進(jìn)行純化，

b)將步驟a)中得到的截短蛋白去除還原劑。

10.一種制備疫苗的方法，其包括將權(quán)利要求5的HPV52病毒樣顆粒或通過權(quán)利要求9的方法獲得的HPV52病毒樣顆粒與藥學(xué)可接受的載體和/或賦形劑混合，任選地還混合一種或多種選自HPV6，11，16，18，31，33，45和58的HPV型別的病毒樣顆粒。

11.一種預(yù)防HPV感染或由HPV感染所導(dǎo)致的疾病的方法，其包括將預(yù)防有效量的權(quán)利要求5的HPV52病毒樣顆粒，或通過權(quán)利要求9的方法獲得的HPV52病毒樣顆粒，或權(quán)利要求7的藥物組合物或疫苗，或通過權(quán)利要求10的方法獲得的疫苗施用給受試者，

優(yōu)選地，所述HPV感染是HPV52感染；

優(yōu)選地，所述由HPV感染所導(dǎo)致的疾病是宮頸癌；

優(yōu)選地，所述受試者是哺乳動物，例如人。