[發(fā)明專利]傳染性法氏囊病毒及用雞胚細胞系和生物反應器繁殖法氏囊病毒制備滅活疫苗和聯苗的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201110180506.1
• 申請日: 2011-06-30
• 公開（公告）號: CN102260649A
• 公開（公告）日: 2011-11-30
• 發(fā)明（設計）人: 王澤霖;王川慶;趙軍;陳陸;王新衛(wèi);楊霞;常洪濤;王雷;周欣;余彬輝;宋羚羚;高煥河
• 申請（專利權）人: 河南農業(yè)大學禽病研究所
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;A61K39/12;A61K39/295;A61P31/14;C12R1/93
• 代理公司: 鄭州大通專利商標代理有限公司 41111
• 代理人: 樊羿

1.一種傳染性法氏囊病毒HQ株，其保藏編號為CGMCC?NO.4935。

2.權利要求1所述的傳染性法氏囊病毒HQ株在制備傳染性法氏囊病病毒疫苗中的應用。

3.一種用雞胚細胞系和生物反應器繁殖法氏囊病毒制備滅活疫苗的方法，包括以下步驟：

(1)細胞種子鏈的擴增，即用細胞生長液在方瓶或轉瓶中培養(yǎng)制苗用細胞；

(2)在消毒后的激流式生物反應器中加入細胞生長液，接種上步所得制苗用細胞進行懸浮培養(yǎng)；

(3)懸浮培養(yǎng)一定時間后向上述激流式生物反應器中接種含傳染性法氏囊病毒HQ株CGMCC?NO.4935，繼續(xù)培養(yǎng)；

(4)接毒后22～28h后，即當耗糖量降至0或近似0時，收獲病毒，反復凍融灌注袋內細胞1～3次，收獲全懸液毒液，測定毒價；

(5)滅活上步所得病毒液，并按規(guī)定的配比制得傳染性法氏囊病病毒滅活疫苗。

4.根據權利要求3所述的用雞胚細胞系和生物反應器繁殖法氏囊病毒制備疫苗的方法，其特征在于，在所述步驟(2)中，每10L的反應器中接種6×10⁹個的細胞數，培養(yǎng)溫度為37～39℃。

5.根據權利要求3所述的用雞胚細胞系和生物反應器繁殖法氏囊病毒制備疫苗的方法，其特征在于，在所述步驟(3)中，在接種細胞后4～5天，懸浮培養(yǎng)至細胞耗糖量最大時，以替換細胞生長液的形式向所述生物反應器的維持液中接入一定量的MOI為0.5～0.9的傳染性法氏囊病毒HQ株CGMCC?NO.4935毒種，37℃下繼續(xù)培養(yǎng)。

6.根據權利要求5所述的用雞胚細胞系和生物反應器繁殖法氏囊病毒制備疫苗的方法，其特征在于，所述維持液含98％DMEM/F12、2％胎牛血清、90～110U/ml抗菌素，其pH?7.2～7.3、DO?30％～50％。

7.根據權利要求3所述的用雞胚細胞系和生物反應器繁殖法氏囊病毒制備疫苗的方法，其特征在于，所述步驟(1)、(2)中的細胞生長液含90％DMEM/F12、10％胎牛血清、90～100U/ml抗菌素，其pH?7.2～7.3、DO體積百分含量30％～60％。

8.根據權利要求3所述的用雞胚細胞系和生物反應器繁殖法氏囊病毒制備疫苗的方法，其特征在于，所述激流式生物反應器為Amprotein?AP-20C或/和Amprotein?AP-10C。

9.根據權利要求3所述的用雞胚細胞系和生物反應器繁殖法氏囊病毒制備疫苗的方法，其特征在于，所述制苗用細胞為雞胚源細胞系DF-1。

10.根據權利要求3所述的用雞胚細胞系和生物反應器繁殖法氏囊病毒制備疫苗的方法，其特征在于，步驟(5)所述傳染性法氏囊病病毒疫苗為傳染性法氏囊病滅活疫苗、雞新城疫-傳染性法氏囊病二聯滅活疫苗、雞新城疫-傳染性支氣管炎-傳染性法氏囊病三聯滅活疫苗、雞新城疫-傳染性支氣管炎-減蛋綜合征-傳染性法氏囊病四聯滅活疫苗中的任意一種或多種。