[發明專利]一種脫膠菌株的篩選方法

在審

• 申請號: 201110179772.2
• 申請日: 2010-09-03
• 公開（公告）號: CN102250804A
• 公開（公告）日: 2011-11-23
• 發明（設計）人: 楊政;曾曉希;倉道平
• 申請（專利權）人: 湖南潤久科技有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 逯長明

技術領域

本發明涉及微生物領域，更具體的說是涉及一種脫膠菌株的篩選方法。

背景技術

苧麻，別名白葉苧麻，多年生宿根性草本植物，是中國特有的以紡織為主要用途的農作物，其單纖維長、強度大，吸濕和散濕快，熱傳導性能好，脫膠后潔白有絲光，可以純紡，也可和棉、絲、毛、化纖等混紡，是重要的紡織纖維作物。

苧麻中含有大量雜質，其中以多糖膠狀物質為主，紡紗前要求將韌皮中絕大部分膠質去除，并使苧麻的單纖維相互分離，這一過程稱為脫膠。傳統的脫膠工藝采用化學脫膠法，即燒堿蒸煮的脫膠方法，該方法污染嚴重、能耗高、對纖維有損傷，已不再適應現代工業生產的要求。

隨著科學技術和現代紡織工業的的發展，出現了一種新的脫膠工藝，即生物脫膠。生物脫膠主要是利用微生物產生的果膠酶、半纖維素酶等分解植物韌皮纖維中的果膠、半纖維素等物質，但不損傷纖維素結構，具有反應條件溫和、節水節能、污染少等優點。苧麻生物脫膠一般包括酶脫膠和菌脫膠兩種方式。酶脫膠是直接利用脫膠酶制劑或者脫膠菌株產生的酶作用于苧麻上，利用酶的生物活性，降解苧麻纖維外包裹的膠質復合體，從而使纖維分離出來；菌脫膠是把經過篩選的脫膠菌株接種到生苧麻上，以苧麻上的膠質為營養源，讓脫膠菌在生苧麻上大量繁殖，在脫膠菌繁殖過程中，分泌出脫膠酶分解膠質，使高分子量的果膠及半纖維素等大分子分解成小分子物質而溶于水中。但是，不論哪種生物脫膠方式都與脫膠菌密切相關，脫膠菌的特性直接影響著脫膠過程的變化和最終脫膠效果，因此在生物脫膠中，菌株的篩選是最重要的環節。

目前研究脫膠菌的篩選方法的報道較多，主要是兩種方法，第一種是采用果膠配制培養基(見吳麗艷等，亞麻脫膠菌的分離、篩選和鑒定，云南大學學報(自然科學版)，2007，29(4)：419-423)，該方法能較快地獲得能分解果膠的菌株，但因為麻類的膠質中不只有果膠，還有半纖維素等物質，因此這種方法會局限脫膠菌的篩選范圍，導致某些脫膠菌不能獲得。第二種方法主要是采用麻類直接進行篩選，例如用劍麻葉篩選脫膠菌株(見陳青等，劍麻生物制漿脫膠菌株的篩選與鑒定及初步應用，農業工程學報，2008，24(6)：277-281)；采用以苧麻粉為唯一碳源的平板培養基進行脫膠菌的篩選(陳楊棟等，苧麻微生物脫膠菌株篩選及脫膠效果評價紡織學報，2010，31(5)：69-72)；用大麻莖篩選脫膠菌株(見彭源德等，大麻快速脫膠菌株的選育與脫膠性能鑒定，紡織學報，2007，28(12)：65-68)。這種方法能篩選到以麻為營養的各類菌株，包括了能分解果膠、半纖維素和纖維素等成分的菌株，但是在麻類脫膠中分解纖維素的菌株會嚴重損傷麻類纖維的品質，因此通過這種方法所獲得的菌株并不都適用于生物脫膠。此外，通過這些篩選方法篩選出的菌株脫膠率較低、脫膠速度較慢，制約了其生物脫膠在生產中的應用。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種脫膠菌株的篩選方法，該方法以苧麻汁為唯一有機營養成分進行篩選，可快速獲得分解苧麻膠質成分的菌株，不損傷苧麻中纖維素成分，脫膠率、脫膠速度較高。

為實現上述目的，本發明提供了一種脫膠菌株的篩選方法，包括以下步驟：

步驟1、將包含有果膠桿菌、芽孢桿菌或腸桿菌的樣品接種到富集培養基中恒溫振蕩培養，所述富集培養基包含3-10％苧麻、0.5-1.5％蛋白胨、0.1-0.5％牛肉膏、0.3-1.0％NaCl，其余成分為水；

步驟2、將步驟1培養后的培養物涂布在初篩培養基上恒溫培養，將在初篩培養基上產生水解圈的菌落進行純化，所述初篩培養基包含5-10％苧麻、0.01-0.08％K₂HPO₄、0.03-0.1％NH₄Cl和1.5-2.5％瓊脂，其余成分為水；

步驟3、將步驟2純化后的菌株接種到復篩培養基恒溫振蕩培養15-24h測定菌株脫膠率，脫膠率大于80％的菌株為篩選出的目的菌株，所述復篩培養基包含8-15g生苧麻、0.01-0.08％K₂HPO₄和0.03-0.1％NH₄Cl，其余成分為水。

在復篩時，設置實驗組和對照組，實驗組即步驟3所述；對照組即復篩培養基中不接種菌株，根據國家標準GB?5889-86中測含膠率的方法測定對照組和實驗組的含膠率，分別記為G₀和G₁，脫膠率為Gr。按公式Gr＝1-G₁/G₀計算得出脫膠率。