[發明專利]自身免疫性疾病抗自身抗體的抗體及其制備方法和用途

無效

• 申請號: 201110178343.3
• 申請日: 2011-06-28
• 公開（公告）號: CN102850457A
• 公開（公告）日: 2013-01-02
• 發明（設計）人: 陳思鋒;欒麗娟;孟丹;陸超;侯彥強
• 申請（專利權）人: 復旦大學
• 主分類號: C07K16/42
• 分類號: C07K16/42;C07K16/06;C12N15/13;A61K39/395;A61P37/02;A61P3/10;G01N33/53;G01N33/577
• 代理公司: 上海元一成知識產權代理事務所(普通合伙) 31268
• 代理人: 吳桂琴

技術領域

本發明屬于生物醫學技術領域，涉及自身免疫性疾病抗自身抗體的抗體，具體涉及自身免疫性疾病抗自身抗體的抗體及其制備方法和該抗體對1型糖尿病治療的應用。

背景技術

現有技術公開了自身免疫性疾病(autoimmune?diseases)是指機體對自身抗原發生免疫反應而導致自身組織損害所引起的疾病，其以特定B淋巴細胞克隆的過度激活和產生大量自身抗體為特征(C.Hu，F.S.Wong，L.Wen，2009，Clinical?and?Experimental?Immunology.157：181-190)。目前針對自身抗體來治療自身免疫疾病的方法尚未見報道。

當前對自身免疫性疾病的治療主要包括糖皮質激素、免疫抑制劑、細胞毒類藥物如環保霉素A等，主要是非選擇性地抑制全部或者一大類T、B淋巴細胞的功能和增殖，在一定程度上控制病情的發展。研究表明，如果長期或者大量使用這些藥物，毒副作用大，對機體免疫功能造成嚴重的損傷。因此尋找新的更有效及更徹底的干預自身免疫性疾病的藥物有著重要的理論意義和應用價值。

據報道，在機體發育過程中，由于遺傳等因素，某些針對機體自身抗原的B淋巴細胞克隆規避了免疫耐受的殺滅作用。每一B細胞克隆只能產生一種特定的抗體。當針對自身抗原的特定B淋巴細胞克隆在成體時與相應的自身抗原相遇，即被激活，分化增殖，產生大量自身抗體，引起自身免疫反應，破壞帶有相應自身抗體的組織細胞。產生自身抗體的B細胞不論是激活還是非激活狀態，表面均帶有自身抗體。因此，有研究者假設，通過制備抗自身抗體的抗體，將過量的這種抗自身抗體的抗體一次性注入患自身免疫疾病的個體體內，不但可中和體液中的自身抗體，還可以與產生自身抗體的B細胞表面的自身抗體結合，誘發抗體依賴的細胞介導的細胞毒作用(ADCC)或補體依賴的細胞毒作用(CDC)，選擇性地殺滅分泌自身抗體的B淋巴細胞的克隆，從而起到治療自身免疫性疾病的目的。由于選擇性地只殺滅產生自身抗體的B淋巴細胞，而且只注射一次，所以能避免非特異免疫治療的副作用。

1型糖尿病是一種器官特異性的自身免疫性疾病，是以胰島β細胞破壞導致胰島素絕對缺乏所引起的一系列糖代謝紊亂為主要表現的臨床綜合癥。其主要發病機制是自身免疫反應，機體在遺傳因素和環境因素的影響下，體內的體液免疫反應和細胞免疫反應啟動后使循環血液中出現了針對體內某些抗原組分的自身抗體，自身抗體還可以與胰島素抗原結合，使其不能發揮正常的功能。約90％新發病的糖尿病病人循環血液中檢測到有胰島β細胞抗體的存在(Bingley?PJ，Bonifacio?E，Williams?AJ，Genovese?S，Bottazzo?GF，Gale?EA，1997，Diabetes.46(11)：1701-1710)。自身抗體主要是通過抗體依賴的細胞介導的細胞毒作用(ADCC)和補體依賴性的細胞毒作用(CDC)，破壞胰腺細胞，使胰島β細胞分泌胰島素的絕對量顯著下降。因此，自身抗體將在1型糖尿病的發生發展中具有重要作用。

發明內容

本發明的目的是提供一種自身免疫性疾病抗自身抗體的抗體及其制備方法。

本發明的進一步目的是提供所述自身免疫性疾病抗自身抗體的抗體在制備治療1型糖尿病的藥物中的應用。

本發明的自身免疫性疾病抗自身抗體的抗體，其特征在于，通過下述方法制備，包括以自身抗體做為抗原的抗原制備、以自身抗體做為抗原免疫試驗對象、獲取抗自身抗體的抗體，

首先用親和層析方法提取試驗對象I血清總抗體IgG，以該總IgG為抗原與免疫佐劑混合，免疫試驗對象II，制得抗總IgG的抗血清，命名為NIgG抗血清；

所述的總IgG包括試驗對象I的正常健康的IgG和自身抗體IgG。

本發明中，所述的試驗對象I和試驗對象II同源。

本發明中，所述的所述的試驗對象I為6周齡NOD小鼠，所述的試驗對象II為正常Balb/c小鼠。

本發明中，還包括所述的抗自身抗體的單克隆和多克隆抗體及其制備方法。

本發明所述的抗自身抗體的抗體的制備方法的部分技術可用于制備抗自身抗體的抗體的基因和相關核酸物質，進一步的制備相關的多肽和蛋白質及其生產的衍生物；更進一步的對所制備抗自身抗體的單克隆和多克隆抗體進行結構和劑型改造制成產品。

本發明制備抗自身抗體的抗體的方法和原理是：每種抗體與其特定抗原結合的結合片斷都是不同的，自身抗體結合片斷上的特殊結合序列對于不產生自身抗體的動物或者人類個體來說是外來抗原，不產生自身抗體的動物或者人類個體在接觸這些特殊結合序列抗原后可產生針對這些特殊結合序列的抗體，即抗自身抗體的抗體。