[發明專利]一種利用外源大豆異黃酮緩解大豆幼苗鹽害的方法

無效

• 申請號: 201110176148.7
• 申請日: 2011-06-28
• 公開（公告）號: CN102282931A
• 公開（公告）日: 2011-12-21
• 發明（設計）人: 武玉妹;周強;於丙軍
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: A01C1/02
• 分類號: A01C1/02;A01G31/00
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 邱興天

技術領域

本發明屬于農作物耐逆調控新技術領域，涉及一種緩解大豆幼苗鹽害的方法，具體涉及一種利用外源大豆異黃酮緩解大豆幼苗鹽害的方法。

背景技術

大豆異黃酮（soybean?isoflavones）是從大豆籽料中提取分離出的具有典型異黃酮類化合物結構的一類活性物質，是大豆中最引人注目的功能成分之一。大量的研究表明，大豆異黃酮具有預防癌癥、心血管疾病和骨質疏松癥、抗氧化和減輕婦女更年期綜合癥等重要生理功能，因而引起了學術界的廣泛關注，成為世界各國科學家研究的熱點之一（宋冰等，2008）。

大豆異黃酮代謝是大豆等豆科植物中的主要次生代謝途徑，大豆異黃酮能在某些豆科植物抵抗逆境過程中發揮多種重要的生態作用，如避免紫外輻射的傷害（Bohm，1998），在植物的地上部，大豆異黃酮可在植物受到病源侵染時誘導合成，以抵抗植物病原微生物的侵襲，是具有廣譜抗菌活性的植物保護素（Harborne?et?a1.，1976；Adesanya?et?a1.，1986；Dixon，2001），對草食性昆蟲具有毒害作用和趨避作用（Lane?et?a1.，1985）；在地下部，豆科植物根系分泌異黃酮類化合物對根瘤菌有趨化作用，還是根瘤菌結瘤基因的誘導物質（Kosslak?et?a1.，1987；Hirsch，1992；Tahara?和?Ingham，2000）。當植物氮素缺乏時，合成異黃酮的基因會被誘導表達，從而產生異黃酮類物質作為根瘤菌的信號分子促使根瘤的形成（Subramanian?et?al.，2004）。

鹽脅迫是植物遭遇逆境的一種，大豆異黃酮代謝可能與植物適應鹽漬環境有關。通過比較耐鹽型和鹽敏感型大豆中的主要次生代謝物發現，大豆異黃酮和大豆皂苷在這兩種類型的大豆中有很大區別，可以利用大豆異黃酮和大豆皂苷指標來鑒定大豆的耐鹽性（Wu?et?al.，2008）。耐鹽野生大豆種子中大豆異黃酮含量遠高于當地同期收獲的不耐鹽栽培大豆品種，而且在可控的栽培條件下，一定濃度的鹽漬條件有促進野生大豆籽粒中大豆異黃酮積累的作用，對于栽培大豆的大豆異黃酮形成則有抑制作用（周三等，2007）。在非豆科植物中，通過外施大豆異黃酮也能改善某些逆境條件下如酸雨和干旱脅迫下植物的生理指標，減輕逆境的傷害作用（葉梅榮等，2008）。然而，內、外源大豆異黃酮與大豆耐鹽性之間的關系并不明確，相關的應用方法或技術，如通過外源大豆異黃酮浸種處理的方式，研究其對大豆植株耐鹽性的影響或對鹽害的生理效應，經檢索目前未見這方面的報道。

發明內容

發明目的：針對現有技術中存在的不足，本發明的目的是提供一種利用外源大豆異黃酮緩解大豆幼苗鹽害的方法，以使大豆幼苗具有較高的耐鹽性，有效緩解大豆幼苗鹽害。

技術方案：為了實現上述發明目的，本發明采用的技術方案如下：

一種利用外源大豆異黃酮緩解大豆幼苗鹽害的方法，包括以下步驟：

（1）用DMSO溶解大豆異黃酮，配置成含1%（V/V）DMSO的大豆異黃酮水溶液，濃度不大于1.0?mg/L

（2）用大豆異黃酮水溶液浸大豆種子，恒溫箱25℃，浸種10?h后置于發芽床上避光催芽；

（3）取發芽苗播于盛有石英砂的具孔塑料杯中，置于盛有1/2?Hoagland營養液的周轉箱中，光照培養，營養液每2~3d更換一次；

（4）待第1對真葉長出時，移苗至具孔的泡沫板上，在盛有用1/2?Hoagland營養液配制的100~130mmol/LNaCl溶液的周轉箱中進行培養，觀察幼苗的生長情況，拍照并測定其葉面積；處理6d后，分為根、莖、葉三部分取樣，采用HPLC法分別測定其大豆異黃酮含量；

其中，大豆異黃酮水溶液為大豆苷溶液或染料木苷溶液。大豆種子為耐鹽性較弱的栽培大豆品種N23674品種，耐鹽灘涂野大豆BB52種群及其經逐代耐鹽性篩選而獲得的雜交后代4076株系。

步驟（1）中，含1%?DMSO的大豆異黃酮水溶液的濃度為0.01?mg/L。

大豆籽粒中含量較多的兩種大豆異黃酮組分為大豆苷和染料木苷，而大豆苷元和染料木素含量較少。苗期耐鹽系數是大豆耐鹽性鑒定的重要指標之一，耐鹽系數值越大，表示耐鹽性越強。把籽粒中大豆異黃酮含量與相應材料幼苗的耐鹽系數作相關性分析，其相關系數為0.696，顯示兩者間具有極顯著正相關關系。大豆異黃酮也是耐鹽型和鹽敏感型大豆中具有顯著差異的主要次生代謝物之一。因此，大豆異黃酮可作為大豆耐鹽性鑒定的參考指標之一，通過測定籽粒中大豆異黃酮含量，無需發芽或苗期培養，即可對大量種質進行批量快速的耐鹽性篩選和鑒定。